Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.
Скачать (прямая ссылка):
Установлено, что срезы клубней сорта Берлихинген с растения, больного морщинистой мозаикой, имеют беловато-голубое свечение, распространяющееся от периферии к сердцевинной части, люминесценция же самих клубней - серовато-фиолетового цвета, ослабленная по сравнению со здоровыми клубнями. У клубней сорта Кобблер с морщинистой мозаикой на основном светло-желтом фоне среза вырисовываются резко ограниченные лучеобразно расходящиеся светлые синевато-серые тяжи, отходящие от столона или кольца проводящей системы j У клубней сорта Эпикур от растений, пораженных полосчатой мозаикой, вся коровая и сердцевинная часть клубня светилась фиолетово-серым свечением, кольцо проводящей системы оставалось желтым. Клубни сорта Потомак с признаками полосчатой мозаики имели голубое свечение, более яркое к периферии клубня.
Как видно из вышесказанного, при практическом применении люминесцентного метода к ранней диагностике вирусных заболеваний картофеля необходимо разработать шкалу люминесценции клубней, как здоровых, так и больных, и уточнить характер свечения различных сортов картофеля при наиболее распространенных вирусных заболеваниях.
Вирусные включения, возникающие при поражении вирусом мозаики растений табака, огурца, лука и других, не люминесцируют. Для их выявления был использован прием флуорохромирования с применением люминесцентной микроскопии.
Кристаллические включения не дают свечения после обработки флуо-рохромами без предварительной фиксации срезов, в то время как ядра в тех же клетках ярко светятся. Фиксация срезов производилась реактивами Грисса и др. Применялись следующие флуорохромы (растворы в дистиллированной воде 1 : 1000): примулин, берберинсульфат, аурофосфин, акридиновый оранжевый. По мнению Гольдина [6J, прекрасным фиксатором для вирусных включений является 1%-ный водный раствор пикриновой кислоты с последующей тщательной промывкой.
Из испытанных четырех флуорохромов наименее пригодным оказался примулин, вызывающий яркое желто-зеленое свечение протоплазмы,
1° Люминесцентный анализ
226 ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВ 1.0 [ГЛ. XIJJ
полностью маскирующее флуоресценцию включений. Берберинсульфат также вызывает свечение протоплазмы, но включения флуоресцируют еще сильнее и легко обнаруживаются. Наиболее четкие результаты были получены с аурофосфином и акридиновым оранжевым.
Методика обработки срезов применялась следующая: 1) фиксация срезов пикриновой кислотой в течение двух и более часов, 2) тщательное промывание водой, 3) обработка флуорохромом в течение 15-30 мии..
4) промывание водой и наблюдение.
Кристаллические включения после обработки акридиновым оранжевым флуоресцируют ярким зеленым светом, а ядра - зеленовато-синим. При более длительном воздействии акридиновым оранжевым включения флуоресцируют оранжевым светом, а ядро приобретает оранжево-розовый оттенок. Обработка среза 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты в течение 15, 60 и 120 мин. при 90° не изменяла флуоресценцию включений. Но ядро в этом случае не флуоресцирует, гасилось также и свечение хлоро-иластов. Длительное воздействие на срез трихлоруксусной кислотой при 90° приводит к распаду ткани на отдельные клетки, в которых ярко люминесцируют включения.
Состав другого типа вирусных включений - X-тела-неоднороден. Один из штаммов вируса мозаики табака характеризуется тремя различными включениями, образующимися в одних и тех же клетках пораженного растения: кристаллические пластинки, игловидные кристаллы и плотные сильно вакуолезированные Х-тела. При обработке акридиновым оранжевым Х-тела не давали свечения, а кристаллические включения давали яркую зеленую люминесценцию. При той же обработке срезов мозаичного лука ядро давало желтовато-оранжевое, а Х-тела - коричнево-красное свечение.
Исследования показали,что люминесцентно-микроскопический анализ дает также возможность отличать зернистые скопления, возникающие в результате разрушения хлоропластов, от сходных с этими образованиями Х-тел. Подобно хлоропластам, и зернистые скопления, образующиеся в результате их разрушения, обладают собственной флуоресценцией.
3. Оценка качества и обнаружение дефектов пищевых продуктов
В иностранной литературе много работ посвящено оценке качества [7 ], [8] и обнаружению дефектов [9] пищевых продуктов при помощи люминесцентного анализа.
Молоко. Согласно данным работы [10], для молока от коров с больным выменем характерны бледные тона флуоресценции желтого цвета. Флуоресценция молока здоровых коров-желто-коричневого цвета; она исчезает при подкислении до pH меньше 4 и при подщелачивании до pH больше 8. Необходимо более детальное бактериологическое и микроскопическое исследование молока во всех тех случаях, когда флуоресценция желто-коричневого цвета дает отклонения от нормы. (Об определении питамина в молоке см. гл. XII, стр. 203.)
Яйца и яичный порошок. Люминесцентный анализ применен для обнаружения порчи яиц, вызываемой бактериями Pseudomonas fluorescens [11]; вначале они образуют колонии на внутренней стороне скорлупы, а через 1-8 днех! проникают в белок, при этом белок начинает флуоресцировать. При флуоресценции всего белка количество бактерий достигает 107 в 1 г и может увеличиться до 109 при дальнейшем хранении. Установлено, что яйца, хранившиеся после носки 58 дней при
