Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
172
Содержание фолиевой кислоты рассчитывают по формуле
(с — in) gWi X= ¦--- мкг/г,
где a, Gi и 0.1 — показания гальванометра для исследуемого холостого и стандартного растворов; g — содержание фолиевой кислоты в 1 мл стандартного раствора (обычно 1 мкг); G— навеска молока, г; v — количество фильтрата, взятого для адсорбции, мл (о=50); Vi — конечный объем раствора, взятого для определения, мл (Vi=20); V — объем гидролизата после разбавления водой, мл (V=IOO).
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
Под действием электрического поля положительно или отрицательно заряженные частицы вещества в жидкости перемешаются вследствие наличия электрического двойного слоя на поверхности раздела фаз. Скорость пе-
ремещения (электрофорез) зависит от природы веществ, концентрации растворенных электролитов и пропорциональна напряженности электрического поля. Соотношение скорости электрофореза к величине напряженности электрического поля зависит от свойств заряженных частиц, окружающей их среды и называется электрофорети-ческой подвижностью.
Для определения белков (по Е. Ждановой и И. Вло-давцу) применяют электрофорез на фильтровальной бу-
173
маге 1 в вероналовом буфере. Белковый раствор наносят на стартовую линию полоски бумаги. Через систему пропускают постоянный электрический ток. Белковые вещества, несущие отрицательный заряд, передвигаются к противоположно заряженному электроду — аноду. Элек-трофоретическая подвижность отдельных фракций молочных белков различна при одинаковой ионной силе, диэлектрической проницаемости, вязкости и температуре. По окончании разделения положение границы каждой фракции определяют по окрашиванию белков на полоске фильтровальной бумаги специальным красителем. Относительное количественное содержание отдельных белковых фракций определяют колориметрически. На рис. 65 приведен универсальный прибор УЭФ для электрофореза.
Исследование раствора казеина
В химический стакан на 150 мл вносят 50 мл обезжиренного молока, нагревают до 400C и осаждают казеин 1 н. раствором уксусной кислоты, приливая ее осторожно при помешивании до образования хлопьевидного (зернистого) осадка и просветления над ним сыворотки. Осадку дают отстояться, сыворотку осторожно сливают. К осадку добавляют 50 мл воды, дают отстояться, промывную воду с осадка сливают, стараясь не затрагивать осадка. Промывку проводят 5 раз. Осадок растворяют в 25 мл вероналового буфера (реактив 86) и под вакуумом фильтруют через бактериальный фильтр Зейца. Концентрация казеина в буферном растворе составляет около 5%.
На полоски фильтровальной хроматографической бумаги размером 40X400 мм точно в центре или несколько ближе к концу, обращенному к катоду, простым карандашом проводят стартовую черту и две черты на расстоянии 70 мм от краев. На одном из концов полоски бумаги записывают условия опыта. Полоску бумаги проводят через кювету, наполненную буферным раствором. Края
1 Разные сорта фильтровальной бумаги обладают различной степенью адсорбции, поэтому в зависимости от сорта бумаги, размеров полосок могут изменяться напряжение, сила тока и продолжительность разделения. Для электрофореза используют следующие сорта фильтровальной бумаги: хроматографнческую медленную Ленинградской фабрики им. Володарского, Ватман № I или Шлейхер п Шюль № 2043а.
174
на расстоянии 50—GO мм должны остаться сухими. Излишки жидкости удаляют, положив полоску между листами фильтровальной бумаги.
Конец чистого предметного стекла шириной 2,5 см погружают в исследуемый раствор, дают стечь излишкам раствора и прикладывают край стекла под некоторым углом к стартовой черте, оставляя в таком положении на несколько секунд, чтобы раствор мог перейти на полоску. Затем заряжают электрофорекамеру. Вынув штатив, помещают полоски бумаги так, чтобы на полочках 1, 2 и 3 (рис. 66), огибая перемычку 4, они располагаются одна на другой. Концы полосок совмещают.
Помещают штатив с полосками бумаги в электрофорекамеру, концы бумажек должны быть погружены в раствор буфера. Закрывают камеру крышкой, запирают и включают ток. Регулятор напряжения устанавливают
Рис. 66. Электрофорекамера с вынимающимся трехэтажным штатисом:
2, S — полочки для полосок бумаги; 4 — перемычка для правильного напрямлення полосок.
на 200 в, включают миллиамперметр. Напряжение тока должно составлять 250—320 е, продолжительность электрофореза—-16—18 ч, сила тока 0,5—0,7 ма на каждую полоску. По окончании злектрофоретического разделения ток выключают, снимают крышку с камеры и высушивают бумажные, полоски в сушильном шкафу 10— 20 мин при температуре 105° С, подвешивая их за концы зажимами или на специальном штативе.
175
После высушивания полоски бумаги окрашивают раствором бромфенолового синего (реактив 128), погружая их в эмалированную ванночку с красителем. Через 20 мин раствор красителя сливают. Полоски бумаги промывают несколько раз 57о-ным раствором уксусной кислоты, пока промывная жидкость и участки бумаги, не содержащие белка, не станут совершенно бесцветными. Вынув полоски из ванночки, их высушивают в сушильном шкафу при температуре 105° С. Для отчетливой видимости окрашенных пятен белковых фракций электрофоре-грамму держат несколько секунд над раскрытой банкой с концентрированным раствором аммиака.
