Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
Вторичные светофильтры подбирают в зависимости от спектральных характеристик флуоресцентных излучений веществ. Вводя соответствующие светофильтры, можно один и тот же флуорометр использовать для исследования различных флуоресцирующих веществ. Применение селенового фотоэлемента как преобразователя световой энергии в электрическую позволяет от сравнения интенсивности свечения фотоэлемента перейти к сравнению электродвижущих сил.
166
определение содержания витаминов B1 и B2
Теоретическое обоснование. Витамин B1 (тиамин) и B2 (рибофлавин) находятся в молоке в свободном и связанном состоянии. B1 при облучении ультрафиолетовыми лучами не показывает заметной флуоресценции. Окислением железосинеродистым калием его переводят в тиохром, спиртовые растворы которого под влиянием ультрафиолетового облучения дают сине-голубую флуоресценцию, количественно измеряемую на флуорометре. При облучении ультрафиолетовыми лучами витамина B2 проявляется желто-зеленая флуоресценция.
Б 7 В 3
Рис. 62. Схема фотоэлектрического флуорометра ЭФ-3:
1 — осветитель; 2 — диафрагма; 3 — заслоика; 4 — первичный светофильтр; 5 — кварцевая оптика; Є — кюветы с испытуемым раствором; 7 — кварцевая оптика; 8 — вторичные светофильтры; 9— фотоэлементы.
Методика определения. В мерную колбу на 100 мл вносят 80 мл молока (лучше сепарированного) и доводят pH до 4—4,5, добавляя около 0,2 мл концентрированной H2SO4. Гидролизуют молоко, нагревая его в той же колбе с обратным холодильником на водяной бане 55 мин. После охлаждения до 37—40РС вносят 0,3 г пеницилли-новой пленки (реактив 66), предварительно растертой с 10 мл 2М раствора уксуснокислого натрия, доводят pH до 4,4—5. После смешивания в колбу вносят 1 мл толуола
167
Ф25
J
и производят ферментативный гидролиз, выдерживай колбу в термостате при температуре 37—400C в течение 13—15 ч. Гидролизат охлаждают и фильтруют в мерную колбу на 100 мл. Осадок на фильтре 2—3 раза промывают водой, собирая ее в ту же колбу и доливают воду до метки. В фильтрате определяют тиамин и рибофлавин.
Витамин Bi. Фильтрат пропускают через адсорбционную трубку (рис. 63), применяя в качестве адсорбента препарат Дель-кассо (реактив 65) слоем 6—7 см. Трубку промывают 10 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты и через нее пропускают 25 мл фильтрата (гидролизата). Адсорбированный в трубке тиамин промывают 30 мл воды, пропуская ее через колонку порциями по
10 МЛ. ЭлЮИруЮТ ТИаМИН КИПЯЩИМ 25%LHbIM
раствором KCl (реактив 64), собирая жидкость в маленький градуированный цилиндр. Объем элюата доводят до 25 мл.
В две маленькие цилиндрические делительные воронки (25 мл) отмеривают по 5 мл элюата. В одну для окисления тиамина в тиохром прибавляют 3 мл 1 %'-ного раствора KeFe (CN)є (реактив 60). Во вторую воронку (холостой) вносят 3 мл 15%-ного раствора NaOH. В обе воронки добавляют по 10 мл изобутилового или изо-амилового спирта (реактив 61), встряхивают 2 мин на встряхивателе. Через 1 ч отстоявшийся нижний слой сливают, а в оставшийся спиртовой слой добавляют около 2 г прокаленного Na2SO4, встряхивают. Совершенно прозрачный раствор применяют для флуорометри-рования.
Одновременно окисляют стандартный раствор тиамина. В две маленькие делительные воронки вносят по 1 мл рабочего раствора тиаминхлорида (реактив 59), содержащего в 1 мл 1 мкг тиамина. В каждую воронку добавляют по 4 мл 25%-ного KCl (реактив 64). В одну доливают 3 мл раствора KeFe(CN) є (реактив 60), а во вторую (холостой опыт)—3 мл 15%-ного раствора NaOH. В обе воронки добавляют 10 мл изобутилового
Рис. СЗ.
Трубка дли адсорбции тиамиич
168
или изоамилового спирта, 2 мин встряхивают на встряхи-вателе. Далее поступают, как указано выше. В результате получают два раствора: окисленного тиамина — тио-хрома и неокисленного тиамина. Из растворов отбирают по 8 мл, вливают в кюветы и приступают к определению.
Стабилизатор включают в электрическую сеть переменного тока напряжением 127—220 є. Стрелку микро-•амперметра устанавливают на 0. Для этого повертывают отверткой корректор в нижнюю сторону. Открывают крышку прибора (рис. 64) и в гнездо 4 вставляют пробирку (кювету) со стандартным рабочим раствором тиа-минхлорида (реактивы 59). В гнездо устанавливают
// W
Рис. 64. Передняя панель флуорометра: / — гальванометр; 2 — вторичные светофильтры;^ 3 — первичные светофильтры; 4 — гнездо с пробиркой; 5 — ключ диафрагмы; 6 — винт реостата корректировки; 7 — клавиш заслонки; 8 и 9 — реостаты плавной и грубой настройки; 10 — контрильная лампа; 11 — рукоятка выключателя; 12 — рукоятка реостата-усилителя; 13 — кнопка.
первичный светофильтр 3 с отметкой Bi — 1 для витамина Вь в боковые гнезда — два вторичных светофильтра Bi — 2 белой точкой в сторону пробирки со стандартным раствором. Крышку прибора закрывают, повертывают рукоятку выключателя 11 до отказа и оставляют на 10—¦ 15 мин для прогрева. После этого нажимают кнопку 13 и реостатом 12 устанавливают стрелку гальванометра на 0.
169
Отпустив кнопку 13, поворачивают ручки реостатов 8 и 9, устанавливают стрелку гальванометра на 0 при нажатой и отпущенной кнопке. Нажимают клавиш заслонки 7 и ключом 5 устанавливают диафрагму так, чтобы стрелка прибора стала на нужное деление (например, на 60). Для уменьшения отверстия диафрагмы ключ вращают по часовой стрелке, для увеличения — против. Вынимают из гнезда пробирку со стандартным раствором и вставляют пробирку с испытуемым, не изменяя положения диафрагмы, нажимают клавиш васлонки 7 и отсчитывают показания гальванометра. Отсчет показаний рабочих растворов проводят так же.
