Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
Окрашивание завершается через 30 мин и сохраняется по крайней мере в течение 30 мин (в водяной бане при температуре 32е С и на воздухе при температуре 22— 29°С). Определяют оптическую плотность этих растворов в фотоэлектроколориметре при 420 нм и по полученным данным строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс содержание лимонной кислоты (в мкг), а по оси ординат — показания прибора.
Пробу молока обезжиривают центрифугированием; 5—10 мл молока разводят водой в мерной колбе на 100 мл. При содержании лимонной кислоты 0,2% в 1 мл приготовленного раствора будет содержаться 100— 200 мкг. К 1 мл разведенного молока приливают пипеткой 1,3 мл пиридина, встряхивают, приливают 5,7 мл уксусного ангидрида, встряхивают. Пробирку помещают в водяную баню при температуре 32 С и выдерживают 30 мин. Не охлаждая содержимого пробирки, производят измерение в фотоэлектроколориметре при 420 нм. Установку прибора на 0 делают по дистиллированной воде.
По калибровочному графику определяют содержание лимонной кислоты в 1 мл разведенного молока (в 1 мкг), умножая на разведение, устанавливают ее содержание в молоке.
Определение содержания фосфора
Общее количество фосфора в молоке. 10 мл молока вносят в мерную колбу на 100 мл и доводят водой до метки: 3 мл разведенного в 10 раз молока минерализуют в маленькой колбе Кьельдаля, прибавляют 2 мл смеси концентрированной серной и азотной кислот (1 : 1), маленькую бусинку (для равномерного кипения) . Содержимое колбы сжигают сначала на слабом
138
огне, затем усиливая нагревание, но не допуская вспенивания.
Когда прекратится выделение бурых паров окислов азота, колбу охлаждают и из капельной воронки, помещенной над колбой Кьельдаля, осторожно добавляют 4—5 капель концентрированной HNO3. Жидкость нагревают до тех пор, пока она не сделается прозрачной, бесцветной или чуть-чуть желтоватой. Затем жидкость охлаждают, прибавляют 5 мл дистиллированной воды, кипятят для удаления остатков окислов азота 3—5 мин и вновь охлаждают. Жидкость количественно переводят в мерную колбу на 100 мл, ополаскивают колбу небольшими порциями воды, сливая ее в ту же мерную колбу, добавляют воду до половины колбы.
Раствор нейтрализуют, осторожно приливая 10%-ный раствор NaOH при индикаторе фенолфталеине, до появления розовой окраски. Затем подкисляют несколькими каплями разведенной серной кислоты до обесцвечивания жидкости и доводят водой до 100 мл. 5 мл этого раствора переносят в мерную колбу на 50 мл и последовательно прибавляют 1 мл раствора молибдеиовокислого аммония (реактив 31, с), I мл 20°/о!-ного раствора сернистокис-лого натрия и 1 мл гидрохинона (реактив 33). Объем доводят водой до 50 мл.
Раствор окрашивается в синий цвет, достигая максимума через 20 -30 мин. Раствор колориметрируют в приборе ФЭК-М с красным светофильтром при длине волны 650—700 нм. По калибровочному графику находят соответствующее количество фосфора.
Для построения калибровочного графика в мерные колбы на 50 мл вносят пипеткой 2, 4, 6, 8 и 10 мл раствора KH2PO4 (реактив 91), что соответствует 20, 40, 60, 80 и 100 мкг фосфора. В каждую колбу прибавляют последовательно те же реактивы, в тех же количествах, как выше. Объем доводят водой до метки, перемешивают. Оптическую плотность растворов определяют от самого слабого с таким расчетом, чтобы каждое исследование проводить точно через 30 мин после внесения реактивов. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество фосфора, по оси ординат показания оптической плотности.
Для холостого опыта в колбу на 50 мл вносят только реактивы в тех же количествах и доводят водой до мет-
139
ки. Появление едва заметного голубого окрашивания не мешает определению При появлении интенсивного окрашивания реактивы необходимо заменить.
Содержание фосфора вычисляют по формуле
«•100
X =--мг %,
0,015 '
где а — количество фосфора, найденное по калибровочному графику, мг; 0,015 — количество молока в 50 мл исследуемого раствора, г; или
б- Ша А" = —-— мг %, О
где б—разведение исследуемого раствора; а — количество фосфора в растворе, найденное по калибровочному графику, мкг; G — навеска молока, взятого для определения, г.
Количество фосфора в сыворотке. В колбу на 50 мл отвешивают 5 мл молока, разводят 25 мл воды, доводят до метки раствором 25%-ной трихлорук-сусной кислоты, охлажденной до 4—5° С, перемешивают, помещают на 30 мин на лед и фильтруют. Фильтрат должен быть прозрачным. 3 мл фильтрата сжигают, определяют и вычисляют содержание фосфора как при определении содержания общего фосфора.
Количество фосфора в растворимых солях фосфорной кислоты. 15 мл фильтрата (см. выше) после осаждения белков трихлоруксусной кислотой нейтрализуют в центрифужной пробирке на 50 ш с фенолфталеином насыщенным раствором Ba(OH)2 до розового окрашивания (pH 8—9). Добавляют 2 мл 20%-ного уксуснокислого бария, перемешивают и пробирку, ставят на лед на 20 мин. Центрифугируют 10 мин. Жидкость сливают, осадок промывают 10 мл 1%-ного раствора уксуснокислого бария и снова центрифугируют. Затем сливают жидкость, осадок растворяют, добавляя 1—2 капли концентрированной H2SO4 и 10 мл воды. Содержимое пробирки переводят в мерную колбу на 50 мл, ополаскивают пробирку водой, которую вливают в ту же колбу и доводят до метки водой.
