Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
Эфирные вытяжки каждый раз после отстаивания в воронке сливают в другую делительную воронку, в ко-
126
торой эфирный слой промывают 3 раза водой до полного удаления щелочи (проба на лакмусовую бумажку). К эфирному экстракту добавляют около 7 г свежепрока-ленного сернокислого натрия. Высушивают вытяжку до полной прозрачности (15—20 мин) и фильтруют через бумажный фильтр. Колбу и фильтр ополаскивают небольшим количеством эфира, сливая его через тот же фильтр. Отгоняют растворитель на водяной бане до получения сухого остатка.
Остаток растворяют в хлороформе (реактив 44) с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось не менее 100 и не более 2000 и. е. витамина D. Из полученного раствора отбирают 1 мл в кювету фотоколориметра, туда же добавляют три капли ацетилхлориде, 6 мл раствора треххлористой сурьмы (реактив 45). Точно через 4 мин интенсивность окраски измеряют в фотоколориметре со светофильтром 500 нм.
В качестве контроля для установки прибора на нуль используют раствор из 1 мл хлороформа, 6 мл раствора треххлористой сурьмы и 3 капель ацетилхлорида.
При составлении калибровочного графика пользуются серией растворов кальциферола в хлороформе, содержащих в 1 мл от 200 до 1000 и. е. витамина D. Основной раствор готовят, растворяя кальциферол в этиловом спирте, так как раствор в хлороформе неустойчив. 10 мг химически чистого кальциферола растворяют в 100 мл спирта, перегнанного над NaOH. В 1 мл полученного спиртового раствора должно содержаться по расчету
4 000000 и. е. витамина D2, так как 10 мг кальциферола соответствует 400 000 и. е. витамина D2. Основной раствор можно хранить в холодильнике 1 год.
Для приготовления стандартного раствора из основного раствора отбирают пипеткой 10 мл и добавляют
5 мл хлороформа. Затем растворители отгоняют в токе CO2, а полученный сухой остаток растворяют в 10 мл хлороформа. Из этого раствора отбирают пипеткой точно отмеренные 0,5; 1; 1,5; 2 и 2,5 мл, добавляют хлороформ до общего объема 10 мл. Затем колориметрируют и строят график.
Содержание витамина D в 1 мл жира рассчитывают по формуле
127
где а — найденное по калибровочному графику количество витамина D в 1 мл раствора, и. е.; V—разведение, мл; g — навеска жира, г; d — плотность жира, кг/м3.
Определение содержания витамина E в молоке
В колбу емкостью 250 мл вносят 100 мл молока, приливают 25 мл 60п/о-ного водного раствора КОН, 20 мл 96%-ного этилового спирта и 2 ч омыляют с обратным холодильником на кипящей водяной бане. Раствор охлаждают, разбавляют 20 мл воды и переносят количественно в делительную воронку, в которой производят извлечение неомыляемой фракции диэтиловым эфиром. На первую экстракцию берут 50 мл, а на две последующие — по 25 мл эфира.
Эфирные вытяжки, соединенные вместе, промывают в делительной воронке 3—4 раза водой до удаления следов щелочи (проба на лакмусовую бумажку или фенолфталеин) и высушивают прокаленным сернокислым натрием (5—7 г). Высушенный прозрачный экстракт фильтруют. Сернокислый натрий промывают на фильтре небольшим количеством эфира, который присоединяют к основному экстракту. Эфир отгоняют на водяной бане в токе CO2-
Полученный сухой остаток растворяют в 5 мл абсолютного спирта (реактив 34) в колбочке емкостью 50— 100 мл, куда приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты плотностью 1,4. На кипящей водяной бане проводят окисление токоферолов. Колбу закрывают пробкой с воздушным холодильником и реакционную смесь кипятят ровно 3 мин. Затем колбу вынимают из бани, охлаждают в проточной воде или водой со льдом и оставляют на 15 мин в темноте для появления максимума окраски. Затем реакционную смесь переводят количественно в мерную колбу на 25 мл и доводят абсолютным спиртом до метки. Если при этом образуется осадок, то его отфильтровывают. Осадок на фильтре не промывают, чтобы не изменить объема спиртового раствора.
В конечном растворе витамина E должно содержаться не менее 100 и не более 400 мкг в 1 мл, так как только в этих пределах можно проводить определение по интенсивности окраски.
128
Оптическую плотность в полученном окрашенном спиртовом растворе витамина E находят с помощью фо-тоэлектроколориметра, применяя синий светофильтр с максимумом пропускания в области спектра 470 им.
Калибровочный график составляют по серии стандартных спиртовых растворов с возрастающей концентрацией а-токоферола в пределах от 100 до 400 мкг в 1 мл. Содержащийся в этих растворах а-токоферол окисляют азотной кислотой и по интенсивности окрашенного продукта реакции находят величину оптической плотности для каждого раствора.
В качестве контрольного раствора применяют абсолютный этиловый спирт (реактив 34), 5 мл которого нагревают так же, как исследуемый раствор с 1 мл концентрированной азотной кислоты в течение 3 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения реакционную смесь разбавляют абсолютным спиртом до того конечного объема, до которого была доведена проба исследуемого раствора.
Содержание витамина E вычисляют по формуле
gVd
X =
GIOOO
где g —найденное по калибровочному графику количество витамина E в 1 мл, мкг; V—общий объем исследуемого раствора с учетом всех разведений, мл; rf— плотность исследуемого раствора; G— навеска а-токоферола, г; 1000 — коэффициент для перевода мкг в мг.
