Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
111
Определение содержания каротина в молоке
Определение содержания каротина основано на сравнении интенсивности окраски его раствора со стандартным раствором чистого каротина или соответствующего ему по окраске раствора азобензола или бихромата калия.
К 100 мл хорошо перемешанного молока в конической колбе емкостью 350—400 мл приливают 10 мл 60%-ного водного раствора KOH (NaOH брать не следует) и 20 мл 96%-ного этилового спирта. Жидкость перемешивают, колбу закрывают корковой пробкой и ставят на 48 ч в темное место с температурой 20—25° С (лучше в термостат) — это холодное омыление. В первый день содержимое колбы периодически взбалтывают. Затем содержимое колбы переливают в делительную воронку на 500 мл. Колбу ополаскивают небольшим количеством воды, которую сливают в ту же делительную воронку.
Омыление каротина щелочью можно провести иначе. К ЮО мл хорошо перемешанного молока в колбе емкостью 300—400 мл приливают 10 мл 60%-ного водного раствора КОН. Колбу закрывают корковой пробкой со вставленным в нее обратным холодильником (или длинной трубкой) и нагревают 2 ч на кипящей водяной бане (горячее омыление). Раствор в колбе охлаждают до 20° С, прибавляют 10 мл 96%-ного этилового спирта, перемешивают и переливают в делительную воронку. Колбу ополаскивают небольшим количеством воды, которую сливают в ту же делительную воронку.
Независимо от способа омыления содержание каротина определяют следующим образом.
К жидкости в делительной воронке приливают 75 мл диэтилового эфира (реактив 24). Пробку закрывают и раствор осторожно перемешивают, избегая образования эмульсии. При образовании эмульсии в воронку прибавляют около 2 мл этилового спирта. После смешивания жидкость в воронке оставляют стоять до разделения водно-щелочного и эфирного слоев. Водно-щелочной слой через кран воронки переливают в колбу, а эфирный слой в другую делительную воронку на 300 мл.
Из колбы водно-щелочной раствор вновь переливают в первую делительную воронку, прибавляют 30 мл диэтилового эфира, перемешивают, дают отстояться для
112
разделения жидкостей. Водно-щелочной слой вновь сливают в колбу, а эфирный слой — в делительную воронку, где находится эфирный слой после первого переливания. Обработку жидкости эфиром порциями по 30 мл проводят еще 2 раза, сливая эфирный слой в ту же делительную воронку. В этой воронке соберется около 165 мл эфирной вытяжки, которую 2—3 раза промывают водой по 20 мл до нейтральной реакции промывных вод по лакмусу.
Промывные воды удаляют, а эфирную вытяжку переливают в сухую плоскодонную колбу емкостью 300 мл и высушивают в течение 30 мин, добавив 7—8 г безводного сернокислого натрия (реактив 39), периодически взбалтывая. Затем эфирную вытяжку фильтруют, колбу и фильтр промывают небольшим количеством серного эфира.
Полученный фильтрат пропускают для адсорбции через колонку (трубку) с окисью магния (реактив 41). Для этого стеклянную толстостенную суженную на одном конце трубку длиной 10—15 см и диаметром около 2 см вставляют узким концом сквозь резиновую пробку в горло колбы Бунзена. В узкую часть трубки плотно вкладывают кусочек гигроскопической ваты.
Для наполнения адсорбционной колонки приготовляют кашицу из адсорбента (реактив 41) и петролейного эфира или бензина. Этой кашицей заполняют колонку на высоту 5—7 см так, чтобы не было пузырьков воздуха между кашицей и стенками трубки. На поверхность адсорбента помещают тонкий слой прокаленного сернокислого натрия. Во время адсорбции верхний слой кашицы должен быть все время покрыт петролейным эфиром или бензином. Колбу соединяют с водоструйным насосом, подливают в трубку для смачивания столбика адсорбента петролейный эфир или бензин и медленно фильтруют исследуемый раствор через колонку.
Колонку промывают петролейным эфиром или бензином до тех пор, пока в колбу не будет стекать бесцветная жидкость, что показывает на полное извлечение каротина из адсорбента.
Полученный раствор вместе с промывной жидкостью переносят без потерь в мерную колбу с притертой пробкой емкостью 250 мл, добавляют до метки петролейный эфир или бензин. Если эфирный раствор каротина очень
ИЗ
разбавлен, то его можно сконцентрировать до определенного объема. После этого раствор колориметрируют (колориметр КОЛ-1М). Содержание каротина в получением растворе устанавливают сравнением интенсивности окраски с окраской стандартного раствора азобензола (реактив 42).
Количество каротина в 1 г молока рассчитывают по формуле
2.35Я1/-0.97
X =-¦ мкг,
an
где 2,35 — количество каротина в 1 тил раствора, соответствующего по окраске стандартному раствору азобензола, мкг; H—высота столба стандартного раствора, см; V — объем вытяжки вместе с промывной жидкостью после пропускания через адсорбент, мл; а — количество молока, взятое для исследования, мл; п—высота слоя испытуемого раствора, см; 0,97 — постоянный коэффициент для перевода объема молока в весовое количество.
Упрощенная методика. В коническую колбу отмеривают 50—100 мл молока, прибавляют 30—40 мл водного раствора 25% -ного KOH и нагревают на водяной бане до полного растворения белков. Жидкость охлаждают, прибавляют 10 мл этилового спирта и содержимое переносят в делительную воронку, куда приливают 30 мл петролейного эфира (с температурой кипения не выше 60° С) или серного эфира. Смесь осторожно взбалтывают. Нижний щелочной слой сливают в другую делительную воронку и еще раз экстрагируют эфиром. Эфирные вытяжки сливают в одну делительную воронку и промывают несколько раз водой, пока вода не станет совершенно бесцветной.
