Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
кого связывания в условиях отсутствия анализируемого лиганда [В*с]0 к специфическому [В*п]0:
Важно отметить, что, как видно из уравнения (5.17), если удачным подбором меченого лиганда или условий проведения
[6* ] - 1
процесса связывания удается сделать jg-fj •< 1, то чувствительность анализа не зависит от константь!пдиссоциации меченого соединения К*, а целиком определяется константой диссоциации исследуемого лиганда.
Помимо чувствительности анализа -- минимально достоверно измеряемой концентрации исследуемого соединения - в качестве характеристики метода широко используется величина предела его обнаружения. В отличие от наименьшей определяемой концентрации предел обнаружения характеризует минимально определяемое его количество. Он равен произведению [L]min х V, где V - объем смеси, в которой протекает процесс конкурентного связывания меченого и немеченого лигандов. Понятно, что, уменьшал V, можно понижать предел обнаружения соединения.
Точность радиорецепторного анализа. Исключительно важной характеристикой анализа является точность измерения концентрации исследуемого соединения, определяемая как относительная ошибка ее измерения (рис. 5.2):
к;ск- _ к;с[1-] _ [ву_0
i.R] о
(5-16)
и выражение (5.15) будет иметь вид
(5.17)
Учитывая. ЧТО S; (5.9), получаем
Е[В‘], и используя выражения (5.2) и
, к;ск* 1 + нс
[R)o
1 + И + ИМ к к-
¦*М)Й
Анализ соотношения показывает, что точность радиорецепторного анализа тем выше, т е. тем меньше> чем меньше
относительная ошибка в определении [В*], чем меньше величина к* к*
отношения - и ниже концентрация меченого лиганда. Последнее предполагает для повышения точности проводить анализ в условиях [L*] <С К* (с учетом замечаний, высказанных в разделе “чувствительность”), В этих условиях выражение (5.19) упрощается и мы имеем
(*М\
\ [L]
еК
/
X
1
К*ск*
1 2 [L]
_|--------1-----—------- I----------1--------L U.
[L] К [R]0 \[L] К К2
(5.20)
Следовательно, в этом случае точность тем выше, чем меньше константа диссоциации меченого лиганда.
Из выражения (5.20) видно, что зависит от измеря-
емой концентрации лиганда, имея минимальное значение, т.е. Д[Ь] ]
дЩ
д
0 при
[L] - К,
I [R]o к*иск*
+
(5.21)
равное
(Л[Ц\ _ ? t1 + (* + у/+~0] (Х + + О
(5.22)
Как следует из уравнения (5.22), максимальная точность определения [L] нё зависит от сродства к рецепторам немеченого лиганда и целиком определяется свойствами меченого лиганда и
Wo
< 1 макси-
препарата мембран. При [L*] -С К* и в случае к,
нс^
мальная точность достигается при концентрациях исследуемого соединения [L], близких к константе его диссоциации К.
Влияние на радиорецепторный анализ гетерогенности рецепторов. Мембранные препараты, получаемые, как правило, из грубого гомогената мозга, обычно содержат несколько типов рецепторов одного и того же классу, например различные типы и подтипы опиоидных рецепторов. Поэтому не редки случаи, когда
лиганды, имеющие специфичность к тому или иному типу реп< п торов данного класса с худшими константами, связываю-! ся и с другим типом рецепторов этого же класса. В работе (Зайцев. Сергеева, Варфоломеев, 1985) проведено рассмотрение влияния гетерогенности рецепторов на характеристики радиорецепторного метода анализа. Показано, что, хотя наличие гетерогенной популяции рецепторов приводит к некоторому уменьшению чувствительности радиорецепторного метода анализа, в основном чувствительность определяется характеристиками связывания лигандов L и L* с высокоаффинными рецепторами.
V.2. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Л ИОФ И ЛИЗОВАННЫХ МЕМБРАН В РАДИОРЕЦЕПТОРНОМ АНАЛИЗЕ ОПИАТОВ И ОПИОИДНЫХ ПЕПТИДОВ
Исследовательская практика, потребности развития рецепторного анализа (Terenius, 1974; Kosterlitz, 1976; Костерлитц, Хьюс, 1981; Вюстер, Лот, Шульц, 1981) выдвигают на передний план проблему получения больших количеств стандартных, стабильных препаратов рецепторов. В этой связи несомненный интерес представляет изучение стабильности мембранных препаратов рецепторов (Brase, 1981; Wood, Pilapil, 1983; Зайцев с соавт., 1984). В свою очередь исследование процессов инактивации мембранных структур позволяет получать ценную информацию о механизме их функционирования (Варфоломеев, Зайцев, 1982; Лузиков, 1985).
Таблица 5.3
Влияние инкубации мембранных препаратов ^0° С) на параметры связывания лигандов с рецепторами при 37° С (буфер А)
Центры связывания
Лиганд Время супервысоко- в ысоко аффинн ый низкоаффиииый
инку аффинный
Кь [Rilo. к2, [R2]o. К-3> [Ralo.
