Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
0,25 0,05 250 100 10 65 2
0,5 0,1 500 200 20 2,7 0,6
1,0 0,2 1000 400 40 1,2 -
2,5 2,5 2496 998 99,8 0,45 -
22 0,05 0,01 67,3 26,9 2,69 74 60
0,25 0,05 336 134,5 13,5 4,8 2
0,5 0,1 673 269 26,9 2 0,6
1,0 0,2 1345 538 53,8 0,89 -
2,5 0,5 3363 1345 134,5 0,3 -
59 0,025 0,005 98 39 3,9 28 9
0,05 0,01 196 78 7,8 9 3
0,5 0,1 1964 786 79 0,6 -
1,0 0,2 3929 1572 157 0,25 -
2,5 0,5 9823 3929 323 0,1 -
90 0,025 0,005 150 60 6 14 7,5
0,05 0,01 300 120 12 5,4 2
0,5 0,1 3997 1599 160 0,25 -
1,0 0,2 5994 2398 240 0,17 -
2,5 0,5 14985 5994 599 0,17
Примечание. 1оЛф ~ отношение уровней радиоактивности связанного меченого лиганда и фона; [L*] - концентрация меченого лиганда,
К* - константа его связывания с рецептором. Условия: уровень
связывания меченого лиганда соответствует 5% от его общей концентрации, эффективность счета радиоактивности - 40%, точность ее измерения - 5%.
неспецифического связывания К*с. Последнюю константу можно выразить в виде
К;с = ^Г? + Кад, (5-11)
где [RHC]o _ общая концентрация неспецифических центров связывания на мембранах; К3 - константа диссоциации, характеризующая сродство меченого лиганда к этим центрам; К*д - константа, характеризующая процессы неспецифического связывания меченого лиганда с фильтрами, центрифужными пробирками. С
к* к*
использованием выражения (5.11) отношение можно пере-
писать следующим образом:
к;ск- _ к- пКнсЬ + к. , (5Л2)
[Я] о [R]o V К
Из уравнения (5.12) видно, что могут реализоваться два крайних случая. Во-первых, неспецифическое связывание преимущественно определяется связыванием меченого лиганда с мембранами,
т.е. К*д <С (это, в частности, наблюдается при связы-
вании опиатов морфина, налоксона и др.). В этом случае в силу постоянства соотношения специфических и неспецифических центров связывания на мембранах
к;ск* к* [r„c]o
-КГ = ИПсГ = co,,st (5ЛЗ)
и не зависит от концентрации мембран. Являясь постоянной величиной для данного мембранного препарата, выражение _К_ _ [Rh|1o зависит от соотношения в нем центров [RHC]o и [R]o-
Поэтому для уменьшения неспецифического связывания, определяемого в основном самими мембранами, можно использовать мембранные фракции, обогащенные рецепторами. Во-вторых, т неспецифическое связывание помимо мембран вносит вклад процесс связывания меченого лиганда с фильтрами, с центрифужными пробирками (такой процесс имеет место при связывании
опиоидных пептидов), т.е. К*д > . В этих условиях
К* к*
отношение ^ц ’ можно записать в виде
к;ск- к- [Мп к-,___________ к-
[Ro] ~[Ro]' iq [R]o [R]o ( >
Из выражения (5.14) следует, что в случае большого вклада в неспецифическое связывание сорбции меченого лиганда на филь-
К* к*
трах или центрифужных пробирках величина отношения уменьшается при увеличении концентрации мембранного препарата. Существуют методы и уменьшения К*д. С этой целью фильтры и центрифужные пробирки подвергают предварительной обработке: силилированию, вымачиванию в среде бычьего сывороточного альбумина и т.п.
Выше уже отмечалось, что чувствительность радиорецептор-ного метода анализа тем выше, чем ниже концентрация меченого
лиганда. [T.“jt поэтому желательно провода- >> анализ и условиях [L*] < К*. В атом глучае легко показан что
(5 15?
и чувствительность анализа не зависит от концентрации меченого лиганда., возрастая при увеличении его сродства к рецепторам. Поэтому при проведении анализа, если существует возможно!,Т!.. необходимо соответствующим подбором условий увеличивать сродство к рецепторам не только исследуемого, но и меченого лиганда.. Если лиганды L* к L относятся к одному типу, то условия оптимизации чувствительности совпадают.
При [L'] <С К* отношение равно отношению неспецифичес-
