Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
0-Ьеи5-энкефалина. Эффект ДЭПК на этот центр обращается гидроксиламином (рис. 4.27). Все это говорит о том, что наблюдаемое нами ингибирующее влияние ДЭПК на связывание D-Ala2, 0-Ьеи°-энкефалина с //-рецептором обусловлено модификацией этим, реагентом имидазола гистидина.
Итак, низкоаффинный центр связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5-энкефалина. (высокоаффинный центр связывания морфина) содержит остаток гистидина, и свойства этого центра, в частности сродство к D-Ala", 0-Ьеи5-энкефалину и морфину, зависят от присутствия в среде ионов Mg2+ и переходных металлов.
Таким образом, результаты корреляционного анализа, химической модификации, исследования рН-зависимос-ти говорят о том, что двух-
и трехвалентные ионы ме-
таллов, увеличивая сродство 6-рецепторов к опиоидам, взаимодействуют с отрицательными зарядами фосфатных групп R-O-PO42-. В случае ^-рецепторов в основе
процесса регуляции связывания опиоидов ионами ме-[nh2oh], м таллов лежит их комплекта А и сообразование с имидазоль-
Рис. 4.27. Влияние гидроксиламина на г
уровень связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5- ной группой. Поскольку энкефалина с низкоаффинными центрами ярко выраженное акТИВИру-мембранного препарата, модг.фициро- ющее ВЛИЯНИе ИМвЮТ ТОЛЬКО ванного ДЭПК (в % от контрольного
уровня связывания [В]0). ионы переходных металлов,
Модификацию ДЭПК проводили в можно полагать, что для
течение 3 мин в буфере В, ГДЭПК]11,2 проявления активирующего мМ; продолжительность инкубации с гидроксиламином - 10 мин, с после-
дующей отмывкой 2-кратным центрифугированием; контрольный препарат f-орбиталей. Полученные В подвергался всем тем же операциям, но Z.
при [ДЭПК]10 работе результаты позволя-
ют также предположить, что ионы таких металлов, как Са, Mg, Mn, Ni, Со, являются эндогенными регуляторами функционирования опиоидных рецепторов в живом организме.
эффекта существенно наличие у ионов-активаторов d- и
V. РАДИОРЕЦЕПТОРНЫИ МЕТОЛ АНАЛИЗА ОПИАТОВ И ОПИОИДНЫХ ПЕПТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРЕПАРАТОВ ЛИОФИЛИЗОВАННЫХ МЕМБРАН
V.I. ПРИНЦИПЫ И ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ РАДИОРЕЦЕПТОРНОГО МЕТОДА АНАЛИЗА
И сследование биохимии и фармакологии энкефалинов, эпдор-финов и опиатов требует разработки и применения высокоспецифических и чувствительных методов анализа этих соединений. Одним из таких методов является радиорецепторный метод (Ferrara, Li, 1980; Labella, 1982; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985; Зайцев, Сергеева, Варфоломеев, 1985). Радиорецепторный метод анализа основан на конкурентном ингибиронянии анализируемым соединением связывания меченого лиганда со специфическими к нему мембранными рецепторами. Следствием применения мембранных препаратов рецепторов являются:
1) высокая чувствительность радиорецепторного метода, связанная с высоким сродством рецепторов к своим лигандам;
2) высокая его специфичность, обусловленная самой природой рецепторов;
3) доступность мембранных препаратов, содержащих рецепторы: исходным материалом для мембран обычно служит мозг животных; при этом техника выделения мембранных препаратов относительно несложна, поскольку радиорецепторный анализ не требует высокой степени чистоты и гомогенности получаемых препаратов;
4) относительная простота разделения свободного и связанного с мембранами меченого лиганда: являясь достаточно крупными частицами мембраны со связанной с ними меткой, легко отделяются от меченого лиганда в растворе путем вакуумного фильтрования или центрифугирования;
5) возможность дискриминации типа лиганда: выше было показано, что, например, опиоидные рецепторы гетерогенны, поэтому, используя в анализе меченые лиганды той или иной селективности, можно определить, к какому типу лигандов следует отнести данное тестируемое соединение;
6) возможность определения агонист-антагонистической при-
роды лиганда; являясь частью биохимической системы передачи сигнала, рецепторы в различных средах по-разному взаимодей ствуют с агонистами и антагонистами: например, для /л-агонис тов опиоидных рецепторов известен так называемый натриевый сдвиг - сильное, более чем на порядок, ухудшение IC50 при добавлении солей натрия, в то время как на сродство антагонистон натриевая среда не влияет: влияние ионов натрия на связывание агонист-ангагонистов существенно менее выражено (табл. 5.1).
Таблица f> . 1
Величина “натриевого сдвига’’ в случае ц-агон-истов, агонист-антагонистов и антагонистов
Соединения “Натриевый Соединения “Натриевый
сдвиг” .сдвиг”
ц-А г о н и с т л Агонист-а антагонисты
Морфин 30 Налорфин 2,1
Леворфанол 10 Антагони с т ы
Эторфин 7 Налоксон 1
Налтрексон 1,7
Примечание. “Натриевый сдвиг” определяется как отношение Ю50 “вытеснения’' соединениями меченого налоксона в присутствии и отсут-ст вие NaCl.
