Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 48

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 108 >> Следующая

Б-Ьеи5-энкефалина с //-рецептором при этом не меняется. Добавление ионов Са2+ в среду инкубации значительно увеличивает уровень связывания 3Н-D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина с высокоаффинным рецептором в контрольном препарате, но не в препарате, преинкубирован-ном с (NH4)2Mo04. И наконец, уровни связывания 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с контрольным препаратом в присутствии высоких концентраций Са2+ близки к уровню связывания лиганда с модифицированным препаратом. Таким образом, результаты по химической модификации высокоаффинных центров связывания D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина молибдатом аммония подтверждают предположение об у 1астии остатков R-0-P042~ в связывании ионов металлов. Применение разработанного нами корреляционного подхода для выявления природы исследуемых катионсвязывающих участков //-рецепторов (табл. 4.10; рис. 4.23) показывает, что близкие к единице значения коэффициентов корреляции наблюдаются в случае имидазола и гистидина. Выше было отмечено, что ионы Са2+ хотя и не активируют, как большинство остальных изученных ионов, //-рецепторы, но также взаимодействуют с их катионсвязывающими участками. Данное предположение подтверждается результатами исследования корреляционных зависимостей (см. рис. 4.23). Итак, полученные результаты позволяют предположить, что ка-тионсвя:нлвающий участок //-рецептора содержит имидазольную группу. Этому предположению соответствует и определенное выше (см. IV.2) значение рКа катионсвязывающего участка , //-рецептора (рКр..,), равное 6,4. На возможное участие остат- ,
расп/ман <10
[Саг+],мм
Рис. 4.24. Уровни связывания 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энк(,фалина в присутствии различных концентраций СаС12 с контрольным препаратом (I) и с препаратом, преинкуби-рованным с 10 мМ молибдата аммония (2). Преинкубация при 37°С в буфере Г, pH 6,0;
инкубация с 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалином в буфере В
ка гистидина в структуре //-рецептора указывают результаты химической модификации мембранного препарата диэтилпиро-карбонатом (ДЭПК) (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1985; Зайцев, 1987). Этот реагент при концентрациях ионов водорода, близких к нейтральным, обладает высокой селективностью к имидазольным группам гистидина:
-О О ^R rR
С2Н5-0-Сч /C-0-C2H5+N4 nh^c2h5-o-c-n xn+c2h5oh+co2.
V 'V NX
(4.14)
Рис. 4.25. Кинетика инактивации центров связывания D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина при преинкубации с ДЭПК (в % от уровня связывания контрольного препарата).
Высокоаффинные центры: ДЭПК, мМ: 5-0,8; 4 - 1,0; 5-1,2; 6 - 1,6
Рис. 4.26. Влияние опиатных лигандов на степень ингибирования ДЭПК связывания 3H-D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина с низкоаффинным центром.
1 - налоксон, Z - морфин, 3 - D-Ala2, D-Leu^-энкефалин. Лиганд-протектор добавляли за 30 мин до добавления в среду преинкубации (буфер В) 0,9 мМ ДЭПК. Время модификации 3 мин
Обработка модифицированного препарата гидроксиламином приводит к обращению эффекта ДЭПК.
Результаты изучения химической модификации опиоидных рецепторов ДЭПК, приведенные на рис. 4.25-4.27, позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, исследование кинетики инактивации опиоидных рецепторов в процессе преинкубации препаратов мембран с ДЭПК (рис. 4.25) показывает, что модификатор ингибирует связывание 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина с
Таблица 4.11
Влияние хлорида никеля на химическую модификацию низке аффинного
центра D-Ala~, D-Leu5 -энкефалина ДЭПК (время инкубации с ДЭПК 3 мин, буфер В, 37*^С)
% специфического связывания
Препарат мембран D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина
с низкоаффинным центром
Контрольный 100
11 реинкубиро ванный 15
с 1 мМ ДЭПК
П реинкубированный 91
с 1 мМ N1CI2 + 1 мМ ДЭПК
//-рецептором, практически не оказывая влияния за изученное время (до 5 мин) на комплексообразование лиганда с 6-рецептором. Во-вторых, присутствие в процессе модификации опиатных лигандов (рис. 4.20) защищает рецептор от модификации. При этом концентрации, уменьшающие инактивацию на 50%, равны 3, 7 и 200 нМ для налоксона, морфина и D-Ala2, D-Leu5-энкeфaлинa соответственно. Эти значения близки константам диссоциации комплексов лигандов с //-рецептором. В-третьих, селективные активаторы комплексообразования D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с //-рецептором - ионы Ni2+ - защищают рецептор от инактивации ДЭПК. Преинкубация препаратов мембран с 1,2 мМ ДЭПК в течение 3 мин приводит к снижению уровня связывания 3H-D-Ala2, 0-Ьеи°-энкефалина с //-рецептором на 85% (табл. 4.11). При добавлении до обработки ДЭПК 1 мМ NiС12 уровень связывания 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина составляет 91%. Как показала проверка, эффект ионов Ni2+ не связан с комплексообразованием иона Ni2+ с ДЭПК. Отсюда следует, что модифицируемая группа входит в состав катионсвязы-вающего участка низкоаффинного центра связывания D-Ala2,
Предыдущая << 1 .. 42 43 44 45 46 47 < 48 > 49 50 51 52 53 54 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed