Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 4.5
Влияние ионов металлов ка связывание 3H-D-Ala^, D-Leu'1-энкефалина с опиоидными рецепторами при pH 7,4 (буфер В, 37° С)
Ион 5-Рецептор ^-Рецептор
металла KMe2 ’ mkM (L)-X KMe2’ mkM (L)"1
Са“+ 1050 ±98 4,3±0,3 2200±300 1,0
Sr2+ 1400±180 3,3±0,3 не onp. не onp.
Мп2+ 210±70 4,2±0,7 70±18 7,4±0,9
Mg2+ 2360±630 4,3±0,9 130±170 7,6 ± 1,5
La3+ 40±12 3,7±0,6 210±48 7,6±1,9
Nd3+ ' 11±2 3,5±0,6 50±11 5,7 ± 1,5
Sm3+ 2,1±0,4 3,8±1,1 22±8 6,3±2,0
Eu3+ 2,8±0,5 2,9±0,1 8±1 6,Oil,9
Gd3+ 1,4±0,5 3,9±1,1 5±1 6,4±2,4
Co2 + 5000 не onp. 4,8±0,9 6,2±1,7
Ni2+ 5000 не onp. 1,8±0,2 5,9±1,1
факт, что La3+ и лантаноиды образуют ряд ионов, имеющих одну и ту же валентность и закономерно изменяющиеся свойства.
Анализ экспериментальных данных по влиянию ионов Mg2+, Со2+, Ni2+, La3+, Nd3+, Sm3+, Eu3+, Gd3+ на связывание 3H-D-Ala2, П-Ьеи5-энкефалина (Зайцев, 1987), показывает: а) отсутствие их влияния на супервысокоаффинный <5]-центр связывания; б) гиперболический характер изменения наблюдаемых констант диссоциации лиганд-рецепторных комплексов К2набл и К3набл при повышении концентрации ионов до значений, не изменяющие но.
(тг~ТГ-------)’гмЛ'ю‘>нМ'2
Wj ^3наIIл I LMeJ
Рис. 4.6. А. Эффект ионов La3+ (1), Nd3+ (2), Eu3+ (5), Sm3+ (4), Gd3+ (5) на связывание 3H-D-Ala2, С-Ьеи5-энкефалина с высокоаффинными центрами в координатах, определяемых выражением (4.4). Б, В. Эффект ионов Mg2+ (1), La3+ (2), Mn2+ (5), Nd3+ (4), Sm3+ (5), Eu3+ (6), Gd3+ (7), Co2+ {8), Ni2+ (9) на связывание 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с 'низкоаффинными центрами в координатах, определяемых выражением (4.4)
силу раствора*^ (рис. 4.6); в) обратимость эффекта ионов (см. табл. 4.2); г) отсутствие комплексообразования их с D-Ala2, D-Ьеи5-энкефалином при концентрациях, оказывающих влияние на рецепцию (см. табл. 4.4). Все это служит основанием для предположения о справедливости схемы (4.1) и для данного спектра ионов и дает возможность определить параметры К^е и а. Соответствующие результаты представлены в табл. 4.5 и позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, с учетом представленных данных можно выделить три группы катионов металлов, существенно различающихся по способности активировать разные
Примечание. В силу ограниченной растворимости большинства изучаемых солей при pH 7,4 концентрации ионов, изменяющие ионную
силу раствора, экспериментально достигались только в случае MgCl2.
типы опиоидных рецепторов: 1) ионы, активирующие связывание 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина как с 6-, так и с //-рецепторами, Mg2+, Mn2+, La3+, лантаноиды; 2) ионы, селективно активирующие связывание 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина с «^-рецепторами, -Са2+ и Sr2+, 3) ионы, селективно активирующие связывание 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина с //-рецепторами, - Со2+ и Ni2+. Во-вто-рых, значения параметра а для каждого типа рецепторов близки в случае всех рассмотренных катионов. Этот факт, а также высокое сродство ионов металлов к рецепторам позволяют предположить, что влияние ионов металлов на связывание энкефалина опосредуется через определенный катионсвязывающий участок на соответствующем рецепторе, в состав которого может входить ионогенная группа. В этой связи представляло интерес исследовать pH -зависимость связывания 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина.
IV.2. ВЛИЯНИЕ pH НА СВЯЗЫВАНИЕ D-Ala2, Б-Ьеи5-ЭНКЕФАЛИНА С РЕЦЕПТОРАМИ
Нами было исследовано влияние pH на параметры комплексообразования D-Ala2, 0-Ъеи5-энкефалина с опиоидны-ми рецепторами мембранных препаратов головного мозга крыс. Обработка полученных данных с использованием разностного метода и программы “Delta” показывает, что при переходе от pH 6,8 к его значениям 5,5 и 8,0 концентрации центров связывания D-Ala2,
0-Ъеи5-энкефалина [Ri]o, [ДгЬ, [11з]о, а также константа диссоциации супервысокоаффинного центра К1Набл не изменяются. При этом К2набл изменяется от 4,4 нМ при pH 6,8 до 59 и 40 нМ при pH 8,0 и 5,5 соответственно и К3набл - от 111 нМ при pH 6,8 до 557 нМ при pH 8,0 и 512 нМ при pH 5,5.
Известно, что изменение pH может приводить к инактивации биологических систем (Жо-ли, 1968). В этом плане важной представляется проверка возможности инактивации препаратов мембран при различных
pH среды преинкудации
Рис. 4.7. Проверка обратимости влияния изменений pH на значение константы диссоциации комплекса 3H-D-Ala , D-Leu5 -энкефалина с <5-рецепторами (К2набл): ^ - пре-
инкубация в течение 30 мин при pH 7,4, К2набл определяли при различных pH среды инкубации; 2 -преинкубация в течение 30 мин при различных pH среды преинкубации, К2набл определяли при 7,4; 3 - без преинкубации, К2набл определяли при различных pH среды инкубации буфер Г, 37°С
значениях pH. Для проверки бы-
pH среды преинкуйации
6,0
19 К1на5л
го
т
SjO_
5,0
6,0
ъо.
8,0
pH среды инкубации
ло изучено влияние различных условий инкубации препаратов мембран на pH-зависимости К2Набл и КзНабл- Результаты проведенных экспериментов представлены на рис. 4.7 и 4.8. Видно, что при значениях pH <6,0 необратимо инактивируются 6- и fi-рецепторы; при pH >6,0 изменения Кгнабл и Кзнабл обратимы и, по всей видимости, определяются положением протонных равновесий ионогенных групп.
