Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 39

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 108 >> Следующая

бавления СаСЬ MrC12 МпСЬ LaCb ZnCl, NiCb
солей
В присутст 1960±390 2500±200 3200±380 5780±650 3500±480 270±35 3780±610
вии солей ме 1850±310 2200±180 2700±250 2950±230 1800±200 1450±205 2860±320
таллов 1780±210 1750±90 2050±310 1810±120 1550±200 1700±200 2000±310
После отмыв
ки ионов бу
фером Б
После отмыв
ки ионов бу
фером Б, со
держащим 10
мМ ЭГТА
Б-Ьеи5-энкефалина с супервысокоаф^инным центром и на концентрации всех трех типов рецепторов. Во-вторых, в присутствии ионов Са2+ и Мп2+ усиливается сродство лиганда к (5-рецептору. Для //-рецептора этот эффект наблюдается только в присутствии ионов Мп2+.
Таблица 4.3 Влияние ионов металлов на параметры связывания ^H-D-Ala*,
D-Leu^-энкефалина (буфер В, 37° С)
Условия Константа диссоциации Концентрация центров свя
зывания, пмоль/мг белка
^1 набл К 2 набл К3 набл [Ri]o [R2]o Рз]о
Контрольный 0,56 4,9 127 0,0027 0,051 0,179
препарат
Препарат, про 0,47 17,2 120 0,0029 0,058 0,179
инкубирован
ный с ЭГТА,
Препарат, пре- 0,50 3,98 109 0,0035 0,060 0,159
инкубирован-
ный с ЭГТА,
+5 мМ СаС12
Препарат, пре- 0,41 4,1 16 0,0039 0,630 0,164
инкубирован-
ный с ЭГТА,
+1 мМ МпС12
Характер изменения значений констант диссоциации комплексов лиганда с /л и 5-рецепторами при увеличении концентрации
Рис. 4.1. Эффект ионов Са2+ (/), Мп2+ (2), ионной силы раствора (эквивалентное по ионной силе количество КС1, добавленное в присутствии 5мМ СаСЬ (•?)), на константу диссоциации комплекса 3H-D-Ala~6 D-Leu5 -энкефалина с рецептором; буфер В, 37°С
Рис. 4.2. Эффект ионов Са~ + (1), Мп2+ (2) и ионной силы раствора (эквивалентное по ионной си ле количество КС'1, добавленное в присутствии 5мМ СаСЬ (•?)). на константу диссоциации комплекса 3H-D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина с рецептором; буфер В, 37°С
ионов Са2+ и Мп2+ в среде демонстрируют рис. 4.1, 4.2. Значения К2набл гиперболически уменьшаются в присутствии низких концентраций ионов Са2+ и Мп2+ (рис. 4.1); при увеличении концентрации ионов более 10 мМ К2„абл увеличивается. Последнее связано с эффектом ионной силы раствора. Действительно, при добавлении в присутствии 5 мМ СаС12 эквивалентного по ионной силе количества КС1, не оказывающего специфического действия на опиоидные рецепторы, наблюдается сходный эффект. Катионы Са2+ и ионная сила раствора не влияют на наблюдаемую константу диссоциации комплекса 3H-D-Ala2, В-Ьеи5-энкефа-лина с /i-рецептором (Кзнабл) (рис. 4.2, 1), тогда как в присутствии ионов Мп2+ происходит гиперболическое уменьшение К3набЛ (рис. 4.2, 2).
Активирующее влияние ионов металлов на сродство 3Н-Г)-А1я"\ D-Leii^-энк^фалина к рецепторам может быть следствием их связывания с рецепторами. Описанный эффект мож<ч Gun, обусловлен и комплексообразованием ионов с молекулой лш анда • • обрачпвпмием более активной его конформации. (' целью про верки щи ледмего предположения исследовали возможности спи <ывлния иоион С,ч/+ и Мгг + с молекулами D-Ala2. D-Loir’—mK1'
мВ
10 20
[Сйг+], мкМ
Рис. 4.3. Зависимость потенциала Са2 ^"-селективного электрода от концентрации хлорида кальция в буфере В в отсутствие (/) и в присутствии 90 мкМ (2) и 2,3 мМ (3) D-Ala2, D-Leu5-энкефалина
Ае, уел.ей.
Л,нМ
Рис. 4.4. Спектры кругового дихроизма (КД) энкефалина в буфере В в отсутствие (Z) и в присутствии 1 мМ хлорида кальция (2)
фалина в условиях инкубации. Для этого были использованы следующие методы. Во-первых, с помощью ионоселективного (Са2+-селективного) электрода измеряли концентрацию свободных ионов Са2+ в присутствии и в отсутствие избытка D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина. Соответствующие результаты представлены на рис. 4.3. Видно, что присутствие D-Ala2, В-Ьеи5-энкефалина в среде не влияет на свободную концентрацию ионов Са2+ в растворе, что говорит об отсутствии комплексообразования Са2+ с D-А1а~, В-Ьеи5-энкефалином. Во-вторых, с использованием метода кругового дихроизма (КД) была изучена возможность изменения конформации пептида в присутствии ионов металла (рис. 4.4). Из данных, представленных на рис. 4.4, видно, что добавление ионов металла в среду инкубации не приводит к сколь-нибудь заметным изменениям спектров КД D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина. Полученные результаты хорошо согласуются с данными работ (Filippe et al., 1979; Hollosi et al., 1980), в которых не наблюдались изменения конформации аналогов энкефалина в водной среде в присутствии ионов металлов. В-третьих, отсутствие комплексообразования ионов Са2+ и Мп2+ с D-Ala2, В-Ьеи5-энкефалином было показано в опытах с использованием сиектрофотометрического индикатора Арсеназо-Ш. Для этой цели измеряли поглощение комплексов ионов с индикатором на характерных длинах волн при избытке или отсутствии энкефалина (табл. 4.4). Выбор концентраций компонентов системы осуществлялся исходя из соотношения концентраций иона, оказывающего воздействие на рецепцию энкефалина, и эффективной равновесной константы нестойкости комплекса ио-
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed