Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 14

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 108 >> Следующая

где [В]общ _ общая концентрация связанного лиганда; Кнс - константа неспецифического связывания.
Обычно константа неспецифического связывания Кнс определяется независимо от других параметров модели (2.9) на основании дополнительных экспериментов по специфическому связыванию (Варфоломеев, Зайцев, 1982; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985), когда в условиях избытка немеченого лиганда измеряют концентрацию неспецифически связанного с рецепторами меченого лиганда. По этим данным с помощью линейного регрессионного анализа находят оценку Кнс Для константы Кнс неспецифического связывания.
Эту информацию используют для построения полуэмпиричес-кой зависимости чисто специфического связывания от концентрации лиганда
II.2. РАЗНОСТНЫЙ МЕТОД АНАЛИЗА ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ
(2.9)
(2.10)
II.2.1. Влияние константы неспецифического связывания Кнс на оценки параметров специфического связывания
Из уравнения (2.9) видно, что вклад неспецифического связывания
[В]„с = Кнс • [L]
в общее связывание В0бщ возрастает с ростом концентрации лиганда L. Обозначим наименьшую константу диссоциации через Кь, а наибольшую через Kj (Kh<Ki). Вклад неспецифического связывания в общую концентрацию связанного лиганда обозначим через у:
Т(И) = [В]нс/[В]общ-
Минимальное значение 7min достигается при малых значениях [L] (L<CKh) и не зависит от [L]:
Tmin = К«/ + К,с j . (2.11)
При больших концентрациях лиганда, когда кривая специфического связывания выходит на насыщение ([L]^>Ki), доля неспецифического связывания приближается к единице (7 —> 1). Относительная ошибка в определении концентрации специфически связанного лиганда <5[В] связана с относительными ошибками измеряемых- величин бВобщ и ?ВНС следующим образом:
ад = ви, • Y^)2 + (<(в].с ¦ j^)2 ¦ (2.12)
Если специфическое связывание рассчитьтается по формуле
(2.10), то имеем
<[В).С = \A<K«)* + («L)’, (2.13)
где Кнс, L - относительные ошибки- в определении константы неспецифического связывания и концентрации свободного лиганда. Отсюда становится понятной важность точного определения наряду с уменьшением погрешности эксперимента (т.е. 6[В]Сбщ и ад.
Совершенствуя методику эксперимента, можно добиться значительного уменьшения погрешности 6[В]0бщ, Иначе обстоит дело с ошибкой определения константы неспецифического связывания: экопнфименты по определению неспецифического связывания проводятся в условиях избытка концентраций немеченого
лиганда (Варфоломеев, 1982, 1985); получаемые при этом оценки Кнс могут существенно отличаться как друг от друга при использовании различных концентраций немеченого лиганда, так и от истинного значения Кнс- В этом случае получаемые при анализе изотерм специфического связывания оценки параметров модели будут сильно отличаться от истинных значений.
Константа неспецифического связывания может быть включена в число искомых параметров регрессии (Munson, Rodbard, 1980) при анализе отдельных изотерм общего связывания ([В]общ)я Lj. При этом также возникают трудности, связанные с тем, что при высоком уровне неспецифического связывания и погрешности экспериментальных данных 6[В]0бщ>5% неизбежны погрешности в оценке Кнс и, следовательно, существенные отклонения от истинных значений оценок параметров специфического связывания. Кроме того, располагая только кривой общего связывания, трудно подобрать хорошие начальные приближения для (Кнс)о и параметров модели [Pj]о, Ki; это, как указывалось выше, может существенно повлиять на качество получаемых оценок. Альтернативой является исключение константы неспецифического связывания из числа искомых параметров, которое можно осуществить с помощью разработанного нами разностного метода обработки экспериментальных данных по общему связыванию лиганда (Зай-,цев с соавт., 1985; Melikhova, Kurochkin, Zaitzev, Varfolomeev, 1988).
II.2.2. Разностный метод анализа комплексообразования лигандов с центрами связывания
Анализ изотерм комплексообразования лигандов с рецепторами
Рассмотрим процесс взаимодействия некоторого лиганда с i независимыми рецепторами, описываемый уравнением (2.3). Будем оперировать величинам и которые представляют собой тангенсы углов наклона прямых, соединяющих начало ко-
Рис. 2.7. Применение разностного метода для анализа изотерм связывания меченого лиганда
ординаг с I очпми на ич'черме связывания с координатами ([LCT], [Вст]) и ([Lj, [Bj]) соотвег' твенно (j = l,..., m: ш - число экспериментальных точек) (рис. 2.7). Назовем точку ([LCT], [Вст]) стартовой. В качестве стартовой точки может быть выбрана любая точка на изотерме связывания лиганда. Используя уравнение
(2.3), разность величин [BCX]/[LCT] и [B,]/[Lj] можно записать следующим образом:
[Вст
[Ur
и
N
[Я,]о
—Ки -f [Jljl _ 1
Е
[RQ° .
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed