Инфекционные болезни национальное руководство - Венгеров Ю.Я.
ISBN 978-5-9704-1000-4
Скачать (прямая ссылка):
В последнее время в практике здравоохранения используют микротест-системы для идентификации микроорганизмов (панели с набором дифференциальнодиагностических сред), что ускоряет исследование. Микротест-системы применяют для определения антибиотикочувствительности микроорганизмов методом разведения антибиотика в жидкой питательной среде. Результаты оценивают по трём категориям: чувствительный, устойчивый, имеющий промежуточную чувствительность штамм. На практике всё ещё существует менее достоверный дискодиффузионный метод — оценка диаметра зоны задержки роста культуры вокруг дисков, содержащих антимикробные препараты. Величина диаметра зоны задержки роста — критерий определения чувствительности изучаемой культуры.
Для оценки антибиотикочувствительности пневмококков и некоторых других микроорганизмов используют Е-тест, позволяющий определить минимальную подавляющую концентрацию. Проведение Е-теста предусматривает создание градиента концентрации антибиотика в питательной среде, на которой высеяна культура возбудителя. Учёт результата основан на феномене подавления роста микроорганизма в зоне, где концентрация антибиотика превышает минимальную подавляющую концентрацию.
Оценивая результаты бактериологического исследования, следует учитывать, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие возбудителя и может быть связан с применением антимикробных препаратов, высокой микробицидной
68 МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
активностью крови, техническими погрешностями. Обнаружение патогенного микроорганизма в материале от больного вне связи с клинической картиной возможно в случае реконвалесцентного, здорового или транзиторного бактерионосительства.
Выделение из крови при соблюдении всех правил асептики условно-патогенных микроорганизмов (эпидермальный стафилококк, кишечная палочка) и даже сапро-фитов следует считать проявлением бактериемии, особенно если они обнаружены более чем в одной пробе материала или в разных субстратах (кровь, моча). При снижении иммунореактивности эти микроорганизмы могут быть возбудителями инфекционных процессов, в том числе и сепсиса. При резком снижении иммунореактивности возможна бактериемия, вызванная 2-3 видами возбудителей.
Определённую сложность представляет трактовка бактериологического исследования нестерильных сред, а именно доказательство этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов. В этом случае учитывают комплекс следующих показателей: вид выделенных культур, количество микроорганизмов данного вида в материале, повторное их выделение в течение заболевания, выделение монокультуры или ассоциации микроорганизмов.
Вирусологический метод
Вирусологический метод включает культивирование вирусов, их индикацию и идентификацию. Материалами для вирусологического исследования могут быть кровь, различные секреты и экскреты, биоптаты органов и тканей человека. Исследование крови часто проводят в целях диагностики арбовирусных заболеваний. В слюне могут быть обнаружены вирусы бешенства, эпидемического паротита, простого герпеса. Носоглоточные смывы служат для выделения возбудителя гриппа, кори, риновирусов, респираторно-синцитиального вируса, аденовирусов. В смывах с конъюнктивы обнаруживают аденовирусы. Из фекалий выделяют различные энтеровирусы, адено-, рео- и ротавирусы.
Для выделения вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы, иногда лабораторных животных.
Источник получения клеток — ткани, извлечённые у человека при операции, органы эмбрионов, животных и птиц. Используют нормальные или злокачественно перерождённые ткани: эпителиальные, фибробластического типа и смешанные. Вирусы человека лучше размножаются в культурах клеток человека или почечных клеток обезьян.
Большинство патогенных вирусов отличает наличие тканевой и типовой специфичности. Например, полиовирус репродуцируется только в клетках приматов, что определяет необходимость подбора соответствующей культуры. Для выделения неизвестного возбудителя целесообразно одномоментное заражение 3-4 культур клеток, так как одна из них может оказаться чувствительной.
Вирус в заражённых культурах (индикация вирусов) определяют по развитию специфической дегенерации клеток, т.е. по цитопатогенному действию, обнаружению внутриклеточных включений, на основе положительных реакций гемадсорб-ции, гемагглютинации.
Цитопатогенное действие вирусов и наличие внутриклеточных включений определяют при микроскопии, регистрируя соответственно морфологические изменения клеток в результате внутриклеточной репродукции вируса или скопления вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме и ядре клеток при специальном окрашивании. При выращивании вирусов в культуре клеток под агаровым покрытием регистрируют образование бляшек, или «негативных колоний», — светлых, по сравнению с окрашенным газоном живых клеток, пятен на месте погибших.
ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ 69
Идентификацию вирусов проводят на основе выявления специфического антигена с помощью иммунологических методов [реакции торможения гемагглютинации (РТГА), связывания комплемента (РСК), нейтрализации (PH), преципитации в геле, иммунофлюоресценции] и выявления специфических фрагментов генома методом ПЦР.
