Руководство по экспериментальной хирургии - Шалимов С.А.
Скачать (прямая ссылка):
Ю. М. Лопухин (1971) рекомендует за 3 ч до операции ввести собаке через зонд в желудок 200 мл растительного масла, 200 мл молока и окрасить эту смесь краской оранжевый судан III, что облегчает нахождение грудного протока.
Создание фистулы грудного протока нецелесообразно, ибо за такими собаками нужен специальный уход, требуется тщательно сбалансированная диета, но даже и в этих условиях быстро наступает либо самоизлечение фистулы, либо фистула инфицируется и собака погибает в раннем послеоперационном периоде.
В последние годы большое внимание уделяется морфологии и функции интраорганного микроциркуляторного сосудистого звена. Входящие в него сосуды, как кровеносные, так и лимфатические с методами инъекции или рентгенографии, а также безинъекционными методами. Наиболее информативны, с нашей точки зрения, методы, предложенные В. В. Куприяновым, А, А. Сушко и П. Слонимским.
Способ А. А. Сушко (1966) позволяет выявлять элементы микроциркуляторного русла в толще стенки органов, чем он выгодно отличается от других, пригодных только для исследования пленочных препаратов. Техника: непосредственно перед опытом готовят 0,25—1 % раствор нитрата серебра на дистиллированной воде и подогревают его и исследуемый орган до температуры +37°С, а затем раствор инъецируют непосредственно в ткань органа. Последний тщательно расправляют на стекле и облучают рентгеновскими лучами при следующих условиях: напряжение на трубке 75 кВ, сила тока 10—20 мА, экспозиция 4—6 мин, фокусное расстояние 20 см, без фильтра. Облученный орган 2—3 дня фиксируют в 5 % растворе нейтрального формалина и еще 3 дня в 10 % растворе, обезвоживают в спиртах восходящей крепости, просветляют в метиловом эфи-
105
ре салициловой кислоты и заключают в бальзам. Выявляются все элементы кровеносного и лимфатического микроциркулятор-ного русла.
Способ В. В. Куприянова (1969) позволяет выявлять микрососуды в брюшине, плевре, капсулах органов и т. д.
С этой целью препарат тщательно расправляют на стекле и от 5 дней до 2 мес фиксируют в 12% растворе формалина. Промывают проточной водой не менее 24 ч. На 30 мин погружают в 70° спирт и ополаскивают в дистиллированной воде, выдерживают в темноте в 20% растворе нитрата серебра в би-дистиллированной воде, ополаскивают водой и проводят через 4—5 стаканчиков с 2% раствором формалина. Быстро проводят через дистиллированную воду (вода, богатая хлоридами, непригодна, ибо препараты в ней сразу черне-ют). До приобретения препаратом желтого цвета инкубируют его в растворе аммиачного серебра, после чего переносят в 0,5% раствор формалина до появления коричнезого оттенка. Затем проводят через аммиачную воду, обезвоживают и заключают в бальзам.
Метод П. Слонимского (1928) также пригоден для выявления микрососудов на пленочных препаратах.
Техника: готовят раствор, состоящий из бензидина 2 г, ледяной уксусной кислоты 20 мл и дистиллированной воды 60 мл. Его тщательно фильтруют и хранят без доступа света. Препарат, в сосудах которого обязательно должна содержаться кровь, погружают в расправленном виде в указанный раствор бензидина (вместо воды лучше использовать раствор Рингера, Тироде, изотонический раствор хлорида натрия, чтобы не наступил гемолиз эритроцитов) на несколько минут, извлекают, обрабатывают 30 мин 3% раствором перекиси водорода и для фиксации окраски гемоглобина дополнительно обрабатывают 3—8% раствором молибденовокислого аммония. Окончательную фиксацию препарата проводят в 80° спирте. При хорошо проведенной реакции сосуды приобретают синий цвет.
Хорошие результаты дают гистохимические методы, в частности выявление сосудов микроциркуляторного звена путем реакции на ЛДГ — лактатдегидрогеназу [Дыскин Е. А. и др., 1976], кислую фосфатазу [Семенова Т. Г., 1965] и аденозинтри-фосфатазу [Шахламов В. А., 1971]. Другие гистологические, гистохимические и гистоэнзиматические методы, электронную микроскопию и авторадиографию выполняют по прописям, приведенным в руководстве Г. А. Меркулова (1969) и др.
Наряду с морфологическими методами исследования в экспериментальной хирургии широко используют методы микроскопического изучения крови и костного мозга, исследования состава различных жидких сред организма и т. д. Некоторые из них, с нашей точки зрения, являются базовыми для научной тематики любого профиля. Владение этими методиками обязательно для сотрудников лаборатории экспериментальной хирургии, поэтому мы их описываем.
Морфологический состав крови (рис. 44) и костного мозга изучают путем исследования мазков и определения процентного соотношения различных клеточных форм. Для приготовления мазков берут тщательно очищенные и обезжиренные предметные стекла. Для этого их моют теплой дистиллированной водой
106
Рис. 44. Клетки периферической крови собаки.
с мылом, просушивают, а затем хранят до использования в жидкости Никифорова (смесь спирта и эфира 1 : 1) в широкогорлой банке с притертой пробкой. Каплю крови или костного мозга (кровь берут из любого сосуда, а костный мозг получают путем пункции грудины или костей таза) наносят на предметное стекло, прикасаются к ней концом стекла с шлифованным краем, устанавливая его под углом 45° по отношению к предметному, и быстрым равномерным движением, направленным по длинной оси стекла, размазывают каплю тонким слоем. Высушивают мазок на воздухе и фиксируют его 3—5 мин в метиловом спирте. Затем фиксированный мазок просушивают на воздухе и 15—• 30 мин окрашивают по Романовскому—Гимзе, либо погружая мазок в эту краску (1—2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды), либо наливая ее на мазок. Окрашенный мазок тщательно промывают в дистиллированной воде, просушивают фильтровальной бумагой и исследуют под микроскопом при большом увеличении с масляной иммерсионной системой. Для получения мазка высокого качества перед нанесением капли крови или костного мозга на стекло его следует слегка прогреть в пламени спиртовки или газовой горелки для удаления паров смеси Никифорова, а затем охладить до комнатной температуры.
