Общая хирургия - Петров С.В.
ISBN 5—8114—0129—9
Скачать (прямая ссылка):
212
Общая хирургия
Таблица 6.3
Оценка результатов определения группы крови перекрестным способом
Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютипирующими сыворотками следующих групп Наличие агглютинации при
реакции со стандартными эритроцитами следующих групп > Группа крови
0(1) А(П) В(П1) AB(1V) O(I) А(11) В(Ш)
— — _ — + + ОцрЦ)
+ .—_-------- — + — — -.—.—--------- + Ар(И)
+ + — — + — В«(ЇІІ)
+ + + — ABo(IV)
+ — агглютинация
- — агглютинация отсутствует
Результат перекрестного способа считается достоверным только если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютиниру-ющими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.
(3) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ
а) Необходимое оснащение
Для определения группы крови используются моноклональные антитела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.
Гибридома — это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту.
Разработаны стандартные реагенты — моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя ли-офилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.
б) Техника проведения реакции
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.
Глава 6. Переливание крови и кровезаменителей
213
Таблица 6.4
Схема оценки результатов определения групп крови с помощью моноклональных антител (цоликлоны анти-А и анти-В)
Наличие агглютинации при реакции с цоликлоном Группа крови
анти-А анти-В
— 0«р (I)
+ 1 — Ар (И)
+ В„ (Ш)
+ + АВ(, (IV)
в) Трактовка результатов
Оценка результатов очень проста (табл. 6.4 ).
Методика определения группы крови с помощью цоликлонов позволяет отказаться от услуг доноров, кровь которых используют для приготовления стандартных изогемагглютинирующих сывороток.
3. ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ
Определение групповой принадлежности с помощью реакции агглютинации может сопровождаться ошибками, которые ведут к неверной трактовке результатов. Все ошибки можно разделить на три группы:
¦ низкое качество реагентов,
¦ технические ошибки,
¦ особенности исследуемой крови.
(1) НИЗКОЕ КАЧЕСТВО РЕАГЕНТОВ
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки и стандартные эритроциты могут иметь низкие агглютинабельные свойства, что приводит к неверному толкованию результатов реакции. Во избежание подобных ошибок следует следить за сроком годности реагента, условиями хранениями, а также их внешним видом (прозрачность сыворотки,отсутствие пленок, хлопьев, запаха гниения и пр.).
(2) ТЕХНИЧЕСКИЕ ОШИБКИ
Ошибки технического характера связаны с несоблюдением или недостаточно точным выполнением всех правил проведения реакции.
а) Несоблюдение внешних условий (плохая освещенность, изменение температуры окружающей среды)
Плохая освещенность мешает обнаружить агглютинацию или ее отсутствие.
214
Общая хирургии
Повышение температуры свыше 25°С резко замедляет агглютинацию.
При низкой температуре (менее 15°С) может произойти неспецифическая агглютинация независимо от состава агглютининов и агглюти-ногенов, так называемая холодовая панагглютинация (агглютинация отмечается при реакциях с сыворотками всех групп крови). Это явление происходит за счет наличия в сыворотке особого холодового агглютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах.
б) Неправильное проведения самой реакции
Нарушение расположения сывороток, соотношения сыворотки и крови, слияние соседних капель и пр. создают возможность неправильной интерпретации полученных результатов.
Ранняя оценка результатов также может привести к ошибке, особенно при наличии подтипа антигена А (слабого антигена А2), дающего позднюю агглютинацию.
в) Недобавление физиологического раствора
Несоблюдение этого простого правила (в капли, где произошла агглютинация, следует добавить изотонический раствор хлорида натрия) может привести к тому, что за специфическую агглютинацию будет принята ложная (псевдоагглютинация).
Под термином псевдоагглютииация подразумевают способность эритроцитов склеиваться в монетные столбики или кучки с сохранением мембран, независимо от их агглютинабельных свойств. Границы между форменными элементами хорошо видны под микроскопом, в отличие от истинной агглютинации, при которой происходит разрушение мембран эритроцитов. Добавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия позволяет дифференцировать истинную агглютинацию от ложной. Псевдоагглютинация расходится довольно быстро, в то время как истинная агглютинация сохраняется прежней или становится более выраженной.
