Аллергические болезни: диагностика и лечение - Паттерсон Р.
ISBN 5-9231-0011-8
Скачать (прямая ссылка):
Характеристика аллергенов
Для характеристики аллергенов применяют различные подходы. Большинство из них, в том числе определение содержания белка, молекулярной массы и
102
изоэлектрическое фокусирование, не относится к уникальным методам исследования аллергенных веществ, а представляет собой известные методы характеристики белков. При исследовании молекул, ответственных за IgE-опосредованные симптомы, применяют различные категории тестов. Наряду с такими иммунологическими методами, как РАСТ и вестерн-блоттинг, широко используют биологические методы in vivo (например, конечная точка разведения при кожном тестировании).
Радиоаллергосорбемтмый тест
Радиоаллергосорбентный тест (РАСТ), предназначенный изначально для выявления аллергенспецифических IgE-AT, может быть использован и для определения концентрации аллергена. Для этого исследуемый аллерген фиксируют на нерастворимом носителе (целлюлозном диске или бусах), к которому добавляют известное количество аллергенспецифических IgE-AT в стандартной тест-системе. После этого сопоставляют результаты, полученные при исследовании экстракта, с тщательно подобранным стандартным референс-препаратом [27]. По определению, чем больше IgE связывается с Аг, тем выше его аллергенность.
Метод подавления РАСТ
При исследовании аллергенной активности широко используют метод инги-биции РАСТ — вариант прямого РАСТ. Содержащую IgE-AT сыворотку больного аллергическим заболеванием смешивают с раствором исследуемого аллергена, после чего добавляют к смеси известное количество аллергена, иммобилизованного на носителе. Чем выше аллергенность экстракта, тем меньше остаётся свободного IgE, количество которого определяют по связыванию с иммобилизованным носителем [28]. Метод и статистическая обработка его результатов к настоящему времени стандартизованы. Метод ингибиции РАСТ используют как основную технику при оценке общей аллергенной активности экстрактов, а также при производстве аллергенов для калибровки новых образцов путём сопоставления с внутренними стандартными препаратами. Впрочем, в последнее время некоторыми исследователями целесообразность дальнейшего использования ингибиции РАСТ по стандартной методике ставится под сомнение [29]. Связано это с тем, что способность аллергена взаимодействовать с фиксированным на носителе аллергеном может изменяться, оказывая таким образом влияние на результаты теста. Кроме того, имеет определённые ограничения и использование аллергенной референс-сыворотки: сравнение невозможно без идентичных рефе-ренс-сывороток и иммобилизованных аллергенов.
Оценка аллергенности
Биохимические методы характеристики аллергенов, касающиеся состава и концентрации белков, практичны, но фактически ничего не говорят об аллергенных свойствах экстракта. Препараты аэроаллергенов содержат большое количество Аг, из которых один или несколько доминирует по способности вызывать кожные реакции у сенсибилизированных больных. Из этого следует, что именно эти Аг представляют значимость и с клинической точки зрения. Однако не все больные, сенсибилизированные к определённым аллергенам, реагируют на тот
103
же аллерген из экстракта. Аг деревьев, злаковых и сорных трав иммунологически различны, и это совпадает с клиническими данными и результатами кожных тестов. Поскольку выделено и очищено большое количество аллергенов, это позволяет надеяться, что корреляция между иммуногенностью и биохимическим составом будет скоро установлена.
Существует предложение определять как главный (основной) аллерген тот, который вызывает положительный результат при кожном тестировании в концентрации менее 0,001 мкг/мл у 90% больных аллергическими заболеваниями [9]. В настоящее время распространение получил подход, согласно которому как главный аллерген расценивают тот, который при радиоиммуноэлектрофорезе связывается с IgE более чем в 50% сывороток сенсибилизированных больных [30]. К малым аллергенам относят все остальные, не соответствующие вышеупомянутым критериям.
Природные аллергены, вызывающие развитие атопических заболеваний, по физико-химическим характеристикам незначительно отличаются от других Аг. Все они представляют собой белки или гликопротеины, хотя в составе Candida albicans обнаружены и высокомолекулярные полисахариды, связывающиеся с IgE. Большинство белков, входящих в состав аллергенов, относятся к кислым, их мол. масса в пределах 5—60 кД. Постулируется, что большие молекулы аллергенов не могут проникать через слизистую оболочку. Среди аллергенов амброзии и трав выявлены также высокореактивные аллергены с небольшой молекулярной массой. Антигенные детерминанты, реагирующие с молекулой IgE, для большинства аллергенов точно не идентифицированы, хотя предполагается, что их должно быть не. менее двух на каждую молекулу. Если для главного аллергена трески Gad с 1 (Аг М) более важна аминокислотная последовательность, чем конформация молекулы [31], то для аллергенов амброзии Amb а 3 (Ra 3) и Amb а 5 (Ra 5) именно конформация молекулы нативного аллергена определяет её аллергенность [32].
