Аллергические болезни: диагностика и лечение - Паттерсон Р.
ISBN 5-9231-0011-8
Скачать (прямая ссылка):
Использование малообъёмных воздухозаборников и получение моноклональных АТ к аллергену Fel d 1 позволили провести точные исследования уровня аллергенов кошки в воздухе [16]. Оказалось, что наибольшие количества аллергена Fel d 1 содержатся в частицах размером не более 2,5 мкм. Во время уборки в воздухе квартиры возникают концентрации, сопоставимые с создаваемыми небулай-зером при проведении провокационного ингаляционного теста (40 нг/м3). Небольшие размеры частиц способствуют тому, что аллергены Fel d 1 сохраняются в воздухе в течение длительного времени. В отличие от них, главный аллерген клещей домашней пыли Derp 1 ассоциируется с частицами диаметром 10 мкм [19] и более, в связи с чем во взвешенном состоянии в воздухе этот аллерген остаётся лишь непродолжительное время после уборки.
Большинство пыльцевых зёрен при световой микроскопии трудно идентифицировать морфологически. Иммунохимические методы разрешают и эту проблему. Для этого пыльцу, собранную в ловушку, наносят на нитроцеллюлозу, затем проводят идентификацию зёрен в люминесцентном микроскопе с применением сандвич-метода, используя специфические АТ к пыльце и меченные флюоресцеином анти-АТ. Метод весьма многообещающ, так как позволяет измерять аллергенный материал, реагирующий с человеческими IgE-AT. В настоящее время выпускают коммерческие наборы для количественного определения главного аллергена клещей домашней пыли Der pin Derfl и главного аллергена кошки Fel d 1 (ALK America, Milford, CT).
СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЭКСТРАКТОВ АЛЛЕРГЕНОВ
Необходимость стандартизации аллергенных экстрактов не вызывает сомнений. Непостоянство состава и концентрации аллергена в экстрактах представляет основную проблему как при аллергологической диагностике, так и для проведения специфической иммунотерапии. Без стандартизации экстрактов невозможно осуществлять и контроль специфической гипосенсибилизации. В связи со значительным различием аллергенной активности экстрактов в каждом из флаконов аллергена врачи часто вынуждены изменять схему проведения иммунотерапии при переходе на новый флакон. При этом каждый пользователь проводит свои исследования активности экстракта, редко сравнивая концентрацию
101
специфического аллергена с аналогичным препаратом другой серии. В результате клиницисты при проведении специфической иммунотерапии аллергенами применяют скорее интуитивный, а не научный подход. Но и в этой области происходят положительные изменения. Появление высокоочищенных или даже клонированных аллергенов, экспрессированных в бактериальных или дрожжевых клетках, позволяет получать неограниченные количества аллергенных экстрактов, практически не отличающихся от маточных растворов [21—26].
Количественная оценка аллергенов
Многокомпонентность биологического материала и чрезвычайно высокая чувствительность IgE-опосредованных реакций иммунной системы, реагирующих на нанограммовые количества Аг, значительно затрудняют стандартизацию аэроаллергенов. Традиционно в качестве метода выделения и стандартизации препаратов аллергенов для клинического применения использовали экстракцию навески обезжиренной пыльцы в определённом объёме жидкости: например, 1 г в 100 мл жидкости представляет собой 1% (1:100) раствор, концентрируемый или разводимый при необходимости.
Одна из широко распространённых систем стандартизации предполагает, что в 1 мл раствора аллергена, разведённого 1:1 ООО ООО, содержится одна пыльцевая единица (единица Нуна, Noon Unit) или одна пыльцевая единица Нуна содержит 0,001 мг экстрагированной пыльцы.
В качестве другой системы оценки количества аллергенов, широко используемой производителями аллергенов во многих странах, в том числе и в России, идпользуюг единицу белкового азота — Protein Nitrogen Unit (PNU). В основе стандартизации по системе PNU лежит положение о том, что большинство аллергенных молекул пыльцы имеют белковую природу, а доля белка в общей массе аллергена у разных растений различается. По этой методике азот выделяют с помощью фосфорновольфрамовой кислоты, а затем измеряют его количество по микрометоду Кьельдаля. Измерение общего азота при стандартизации аллергенов практически не применяют.
Оба методических подхода используют при стандартизации не только пыльцевых, но и других ингаляционных и пищевых аллергенов, и врачи должны ориентироваться в этих стандартах. Однако ни один из этих методов не отражает аллергенной активности, так как далеко не все экстрагированные белки обладают аллергенными свойствами. Кроме того, многие комплексные аллергены разрушаются при проведении жёсткой процедуры выделения. Эти проблемы возникают при проведении биологических исследований функциональной активности аллергенов. Пыльца амброзии и злаковых трав, а также аллергены клещей домашней пыли и кошки стандартизованы, а их активность выражена в единицах аллергенной активности (Allergen Units, AU) или биологических аллергенных единицах (Biological Allergenic Units, BAU). Список стандартизованных таким образом аллергенов постоянно пополняется.
