Аллергические болезни: диагностика и лечение - Паттерсон Р.
ISBN 5-9231-0011-8
Скачать (прямая ссылка):
Прибор Андерсона (Anderson) — ещё один волюметрический сборник, его отличает возможность улавливать жизнеспособные грибные споры. Воздух проходит через серию ситоподобных пластин (либо 2, либо 6), каждая из которых имеет по 400 отверстий. По мере продвижения воздуха от пластины к пластине диаметр отверстий уменьшается. Под каждой пластиной располагаются чашки Петри с питательным раствором. Наиболее крупные частицы задерживаются верхними, а мелкие — нижними пластинами. Споры, прошедшие через отверстия, попадают на агар, в последующем формируя колонии. Этот метод применяют для идентификации грибов, морфологические особенности спор которых не позволяют идентифицировать их при микроскопировании. В целом сбор нежизнеспособных материалов технически более точно отражает действительное соотношение количества спор сравнительно с культуральными методами.
Объём воздуха, прошедший через всасывающий прибор в спокойных условиях, легко просчитывается, поскольку вакуумный насос обычно откалиброван. Для вращающихся ударных сборников пыльцы существуют специальные формулы,
99
учитывающие площадь реагирующей поверхности, скорость вращения и время экспонирования, так что после окрашивания и подсчёта частиц их количество может быть представлено в виде содержания частиц в определённом объёме воздуха (обычно в 1 м3).
При проведении исследований по подсчёту количества пыльцы и спор очень важно правильно расположить прибор. Наземное положение обычно нежелательно. Наиболее часто сборники размещают на крышах зданий, по крайней мере в 6 м от различных препятствий и на 90 см выше парапета крыши. Хорошие результаты при использовании в пыльцевых коллекторах показали такие липкие вещества, как силиконовая смазка (Sampling Technologies, Minnetonka, MN), бензиновая смазка (А.Н. Thomas, Philadelphia); резиновый клей, силиконовое масло и глицерин менее надёжны, так как их свойства изменяются в зависимости от влажности и температуры.
Подсчёт спор грибов культуральным методом
Наряду с гравитационными и другими описанными выше методами исследование спор грибов проводят путём культивирования. Споры многих видов грибов в связи с большим сходством не могут быть идентифицированы морфологически, что требует исследования колоний грибов в культуре. Для этого покрытые питательной средой чашки Петри оставляют открытыми в течение 5—30 мин, а затем инкубируют в течение 5 дней при комнатной температуре, после этого окрашивают и подсчитывают число и тип проросших колоний. Рост большинства аллергенных грибов поддерживает картофельно-декстрозный агар, куда для подавления роста бактерий и чрезмерного распространения грибковых колоний добавляют антисептик. Для исследования некоторых видов грибов (например, Aspergillus или Penicillium) применяют специальные среды (например, среду Чапека).
К основным недостаткам метода культивирования на чашках Петри относится значительная недооценка количества спор, устраняемая при использовании насосных приспособлений (например, приборов типа Anderson или Burkhard, см. выше). Содержащие большое количество спор микроконидии часто дают рост только одной колонии. Возможно также взаимное угнетение или избыточный рост одной колонии, как это бывает у Rhizopus nigricans. Другим недостатком культивирования является короткий период времени для забора материала, а также то, что некоторые грибы не растут на обычно используемых средах.
Иммунологические методы
К настоящему времени разработаны иммунологические методы идентификации и количественного анализа аэроаллергенов. В будущем комплекс этих методов должен заменить существующие физические способы подсчёта. Иммунологические методы не зависят от морфологических особенностей исследуемого материала и сводятся к определению способности собранного с фильтров элюата взаимодействовать с IgE- или IgG-АТ человека [15] или мышиными моноклональными АТ [16]. В клинике Мауо проведены исследования с использованием сборника частиц большого объёма, который улавливал на стекловолоконный фильтр 95% частиц размером более 0,3 мкм. Элюированную с фильтра смесь аллергенов диализовали и подвергали лиофильной сушке, а затем исследовали с помощью
100
теста ингибиции РАСТ на специфическую аллергенную активность или с помощью IgG-AT для выявления аллергенов, вызывающих экзогенный аллергический апьвеолит. Метод показал высокую чувствительность: элюат, содержание аллергена в котором было эквивалентно 0,1 мг пыльцы, угнетал РАСТ с аллергеном амброзии на 40-50% [17], а также вызывал положительные реакции при постановке кожных проб [6] . Содержание аллергенов, выявляемых иммунологическим методом, коррелировало с количеством пыльцы и спор грибов, выявляемым традиционно используемыми методами, а также с выраженностью вызываемых ими симптомов у сенсибилизированных больных. Применение этого метода показало, что аллергенными свойствами обладают не только цельные пыльцевые зёрна амброзии, но и их детрит, причём эта активность сохранялась и после сезона цветения растений. Кроме того, выявлена значительная аллергенная активность частиц диаметром менее 1 мкм [18].
