Антифосфолипидный синдром - Насонов Е.Л.
ISBN 5-98216-010-5
Скачать (прямая ссылка):
Волчаночный антикоагулянт (ВА)
У больных АФС часто обнаруживают ВА — разновидность аФЛ, которые реагируют с белками плазмы ф2-ГПЛ, протромбин и аннексин V) (таблица 8.1). При скрининге для определения ВА можно использовать
SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page
11
ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител
функциональные тесты (АЧТВ, тест с ядом гадюки Рассела, определение каолинового и протромбинового времени). Установлено, что ВА in vitro увеличивает продолжительность фосфолипидзависимых реакций свертывания крови, воздействуя на Са2+-зависимое связывание протромбина, фактора Xa и Va с поверхностью фосфолипидов, в процессе сборки протромбинового активаторного комплекса (протромбиназы). При подозрении на АФС крайне желательно использовать набор тестов, так как каждый из тестов в отдельности дает положительные результаты только в 60—80% случаев. Поскольку специфичного прямого теста для определения ВА не разработано, для дифференциации между присутствием в плазме ВА и дефицитом факторов свертывания необходима постановка подтверждающих тестов. Для этого можно использовать определение АЧТВ в безтромбоцитарной плазме. У больных с ВА не происходит нормализации свертывания при смешивании исследуемой плазмы с нормальной плазмой в соотношении 1:1 или 4:1. Нормализация свертывания при добавлении фосфолипидов в гексагональной фазе (нейтрализует действие ингибиторов) свидетельствует о специфичности ВА к фосфоли-пидам2, 3 7.
Хотя обнаружение в крови ВА нередко лучше коррелирует с клиническими проявлениями АФС, чем уровень аКЛ, выявляемых с помощью ИФМ (см. ниже), этот метод имеет определенные недостатки и ограничения. К ним относятся невозможность определения ВА у больных, получающих гепарин, ложноположительные и ложноотрицательные результаты, трудность стандартизации. Например, у беременных нередко получают ложноотрицательные результаты скрининговых тестов, что обусловлено увеличением концентрации циркулирующих факторов свертывания (например фактора VIII).
J. Hanly и соавт.8 описали хромогенный метод определения аФЛ, основанный на измерении времени образования тромбина (thrombin generation time — TGT), когда в лунки микроплат к смеси нормальной плазмы, тромбопластина и хромогенного субстрата тромбина добавляется плазма больных АФС в соотношении 2:1 и после активации кальцием проводится кинетическое измерение генерации тромбина по изменению окраски субстрата. Показано, что плазма больных АФС, позитивных по ВА и
SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page
12
Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром.
а?2-ГП-I, а также моноклональные а?2-ГП-I обладают способностью удлинять TGT. По сравнению с тестом на ВА, TGT-тест имеет более высокую чувствительность, позволяет исследовать одновременно большое количество образцов.
Антитела к кардиолипину (аКЛ)
аКЛ реагируют с отрицательно заряженными фосфолипидами — кардиолипином и фосфатидилсерином, образующими комплекс с белками плазмы ф2-ГПЛ, протромбин или аннексин V)1, 2. Для определения аКЛ применяют иммуноферментный метод, позволяющий выявлять так называемые ?2-ГП-I-зависимые аКЛ. аКЛ могут относиться ко всем 3 основным классам иммуноглобулинов (IgG, и 1^А), но основное клиническое значение имеет определение IgG аКЛ и в меньшей степени IgM.
График распределения результатов ИФМ определения аКЛ не соответствует закону нормального распределения, имея вид экспоненциальной кривой, что затрудняет использование параметрических тестов при интерпретации полученных данных. Для стандартизации результатов используют единицы GPL/MPL (IgG/IgM phospholipid binding units), которые устанавливаются с помощью контрольных сывороток, предоставляемых лабораторией по стандартизации антифосфолипид-ных антител. Имеются также стандарты для количественного определения IgA аКЛ9. Одна единица GPL соответствует фосфолипидсвязываю-щей активности 1 мкг/мл IgG аКЛ, а одна единица MPL1 мкг/мл IgM аКЛ, очищенных методом аффинной хроматографии. Пересчет показателей ОП исследуемых сывороток в единицы концентрации GPL и MPL осуществляется с помощью построения калибровочной кривой зависимости логарифма ОП стандарта от логарифма концентрации аКЛ, представленной уравнением линейной регрессии10, 11. При этом распределение полученных данных превращается из исходно ненормального в нормальное, что позволяет использовать параметрические статистические методы1.
Верхняя граница нормальной концентрации IgG аКЛ в сыворотке крови составляет от 7,0 до 23,0 GPL, IgM аКЛ — от 6,0 до 15,0 MPL12.
SHS-OOO4.qxd 21.11.2006 16:56 Page
ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител
Результаты анализа преобразованных данных целесообразно применять в диапазоне нормальных концентраций аКЛ у здоровых лиц, однако трудно интерпретировать при выявлении аКЛ-положительных результатов у пациентов с "вероятным" АФС. Так, среди 500 больных СКВ из 53,2% случаев с положительными результатами определения аКЛ, титры которых превышали нормальный средний уровень на 2 SD, у 30% больных отсутствовали клинические признаки АФС13. При этом, несмотря на корреляцию высоких титров аКЛ со степенью выраженности клинических проявлений АФС, обнаружение аКЛ в любых титрах не всегда связано с данным симптомокомплексом.
