Герпетическая инфекция - Мардланды С.Г.
ISBN 5-8311-0201-7
Скачать (прямая ссылка):
44444,444v.444-44^44^44^4V.44^44^44;\v.^^v.444-^4tVv:444\\4^.44^-4; й vi44444^v-44\4v.\--Лч •'
27
Время анализа составляет 1 час 15 мин при выявлении IgG-аитител и 1 час 45 мин при выявлении IgM-антител (кроме указанных в схеме этапов, исследуемые образцы перед внесением в лунки иммуносорбента в течение 30 мин обрабатываются блокирующим раствором).
ИФА со всеми тест-системами ставится при комнатной температуре, т.е. для работы не требуется термостат и, соответственно, не возникает так называемый “краевой эффект”, нередко имеющий место при инкубации в термостатах больших количеств планшетов и отрицательно сказывающийся на точности анализа.
Как уже было сказано выше, фактором, существенно повышающим диагностическую ценность ИФА при диагностике герпетической инфекции, является возможность дифференциации типос-пецифичности возбудителя.
Для оценки способности тест-систем “ЭКОлаб-ВПГ-1-IgG” и “ЭКОлаб-ВПГ-2-IgG” дифференцированно определять антитела класса IgG к ВПГ обоих типов было проведено сравнительное исследование 98 образцов сывороток, предварительно исследованных на наличие соответствующих антител в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). 14 образцов при этом были оценены как отрицательные, 2 образца были оценены как сомнительные и 82 - как положительные.
По результатам ИФА те же образцы оценивались с использованием соотношений оптических плотностей, полученных в лунках с исследуемыми образцами, и оптической плотности в лунках с КПОр, т.е. по величинам К=ОПиссл/ОПКпор. Соответственно, значение К, меньшее 1,0, позволяло оценивать результат ИФА как «отрицательный», значение К, большее 1,0, - как «положительный», а значение К, равное 1,0, - как «сомнительный» или «пороговый».
Соотношение оценок образцов в ИФА и РНИФ, полученное при определении антител класса IgG, представлено диаграммами на рис. 3.
Данные, представленные на рис. 3, свидетельствуют о высокой степени соответствия оценок образцов, полученных обоими методами.
Об этом же свидетельствует сопоставление значений коэффициента К и титров антител, полученных в РНИФ, при исследовании сывороток, оцененных обоими методами как положительные (см. табл. 2 и рис. 4). Данные, приведенные в табл. 2 и гіроиллюс-
28
Результаты РНИФ Результаты ИФА
| 1 Отрицательно Сомнительно Ц§Д Положительно
Рис. 3. Сравнительные результаты оценок исследованных образцов в РНИФ и ИФА
трированные рис. 4, не оставляют сомнений в наличии тесной связи между обоими показателями, что доказывает надежность определения титра антител класса IgG к ВПГ-1 с использованием тест-системы “ЭКОлаб-ВПГ-1 -IgG”.
Таблица 2
Распределения значений К и логарифмов титров антител класса IgG к ВПГ-1 в совокупности сывороток, "положительных" по оценке в ИФА и РНИФ
№ группы образцов Число образцов в Среднее по группе Средний по группе
группе значение К логарифм титра
антител в РНИФ
1 2 1,73 1,6
2 3 2,54 2,1
3 2 3,52 1,75
4 6 4,66 2,92
5 22 5,46 2,73
6 24 6,46 2,98
7 16 7,39 3,11
8 6 8,38 3,58
9 1 9,16 3,71
29
Ig титра
Рис. 4. Распределения показателей ИФА и РНИФ в совокупности образцов, "поло-жительных"по наличию антител класс IgG к ВПГ-1
Те же 98 образцов сыворотки были исследованы затем в тест-системе “ЭКОлаб-ВПГ-2-IgG”. Распределение полученных при этом оценок в сравнении с оценками, полученными в тест-системе “ЭКОлаб-ВПГ-1-IgG”, представлено в диаграммах на рис. 5.
Как видно из рис. 5, налицо четкая дифференциация типоспе-цифичности антител в исследованных образцах. При чем те 4 % (4 случая), в которых этой дифференциации не произошло, скорее всего, связаны с тем, что соответствующие сыворотки действительно содержат антитела к обоим типам вируса, поскольку для этих образцов характерны высокие значения коэффициента К в обоих тест-системах и высокие титры в РНИФ.
ЭКОлаб-ВПГ-1 ЭКОлаб-ВПГ-2
Группы сывороток
Отрицательно ¦¦ Сомнительно Положительно
Рис. 5. Распределения оценок 98 образцов сывороток, исследованных на наличие антител класса IgG к ВПГ-1 и ВПГ-2 в тест-системах "ЭКОлаб-ВПГ-1 -IgG" и "ЭКОлаб-ВПГ-2-lgG"
