Инфекции в акушерстве и гинекологии - Макаров О.В.
ISBN 5-98322-263-5
Скачать (прямая ссылка):
1.5.1.4. Молекулярно-биологические методы
Эти методы основаны на определении специфических для инфекционного агента последовательностей ДНК или РНК. Основной принцип метода заключается в многократном копировании (амплификации) искомых участков ДНК при участии термостабильной полимеразы. В результате этого получают большое количество гомологичных участков ДНК, специфических для данного возбудителя (амплификонов). Метод называется ПЦР. Учет конечных результатов при ПЦР оценивается с помощью электрофореза или ИФА. Этот метод так же, как и РИФ, пригоден только для выявления активных форм вируса и острого хламидиоза. Диагностировать с его помощью вирусоносительство или персистирующий хламидиоз нельзя, однако он незаменим при диагностике хронической гонореи, вызванной L-формой, когда N. gonorrhoeae окрашивается по Граму атипично (грамположительно), а иногда практически отсутствует в мазке.
Правила забора материала для анализа методом ПЦР не отличаются от таковых при РИФ. Материал может храниться в холодильнике в транспортной среде при 4—6°С не более 3 дней, а образцы мочи должны быть доставлены в лабораторию в течение 24 ч после их получения. При необходимости допустимо сохранять материал в течение 1 мес. при температуре — 20°С. Чувствительность этого метода составляет 80—100%.
По поводу диагностической ценности ПЦР идут бесконечные споры. К безусловным достоинствам метода относятся облегчение работы врача (берется одна проба на все исследования), относительно быстрое получение результата (12—24 ч), относительно невысокая цена расходных материалов. Недостатками являются высокая стоимость оборудования, необходимость специальных помещений, большой риск загрязнений между образцами и продуктами амплификации. Следует особо отметить, что при интерпретации результатов ПЦР необходима определенная осторожность, так как этот метод выявляет только небольшую часть генома микроорганизма, что не является критерием жизнеспособности возбудителя. Например, хламидийная ДНК может продолжать выявляться в течение 1 мес. после окончания лечения антибиотиками. Кроме того, метод ПЦР позволяет провести только качественную оценку без определения количества возбудителя, поэтому результаты анализов на УПМ (дрожжевые грибы, гарднереллы, урогенитальные микоплазмы) носят характер скрининга и требуют дальнейшей проверки.
В настоящее время появилась система IQ5 («BioRad»), позволяющая в значительной степени преодолеть трудности, связанные с ПЦР. Отличие этой системы заключается прежде всего в том, что используемые в работе амплификоны имеют флюоресцентную метку. Амплификатор снабжен оптическим модулем, позволяющим считывать интенсивность свечения в процессе амплификации ДНК возбудителя. По мере накопления продуктов реакции происходит увеличение флюоресцентного сигнала. Динамика изменения интенсивности свечения зависит от начального количества ДНК-мишеней. Таким образом, появляется возможность не только выявить возбудитель, но и провести его полуколичественную оценку. Следовательно, эту систему можно использовать для выявления УПМ. Кроме того, 1Q5 позволяет проводить в одной пробирке одновременно несколько реакций с разными флюорофорами (люминесцентными красителями). Таким обра-
генитальные инфекции и факторы противоинфекционной защиты в генезе
воспалительных заболеваний женских половых органов 71
зом, не только снижается риск контаминации образцов при их обработке, экономится время проведения исследования, но и сокращаются производственные плошади, необходимые обычно для проведения ПЦР. К единственному недостатку этой системы можно отнести ее относительно высокую стоимость.
1.5.1.5. Иммуноферментный анализ
ИФА основан на взаимодействии специфического антигена с антителом с последующим выявлением образовавшихся в результате этой реакции комплексов с помощью цветной биохимической реакции. В качестве выявляющей метки используют пероксидазу хрена или З-З'-диаминобензидинтетрагидро-хлорид. Для учета результатов лаборатория должна быть оснащена специальным прибором — ридером.
ИФА может быть диагностическим (с выявлением антигена) или скринин-говым (определение специфических антител). Диагностические ИФА разработаны только для выявления Chlamydia trachomatis. Выявление специфических антител проводится при вирусных и хламидийной инфекциях.
Выявление антигена хламидий проводят чаще методом твердофазного ИФА. Материал для этого исследования забирают тампоном в специальные транспортные пробирки, которые поставляются производителями наборов, и доставляют в лабораторию. При взятии материала имеют значение все правила и ограничения, принятые для ПИФ или ПЦР. Хранят материал при температуре 4—6°С не более 48 ч. Такие наборы, как «Chlamydiasyme Diagnostic Kit», производит фирма «Abbott Lab», «Syva Microtrak EIA» — «Syva», «Chlamydia Ag EIA» — «Labsystems» и др. Результаты анализа во многом зависят от качества забора материала и от состояния больной. У женщин с выраженной клинической картиной чувствительность метода составляет 88—100%, однако при бессимптомных заболеваниях чувствительность не превышает 40%.
