Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Макаров О.В. -> "Инфекции в акушерстве и гинекологии " -> 131

Инфекции в акушерстве и гинекологии - Макаров О.В.

Макаров О.В. Инфекции в акушерстве и гинекологии — МЕДпресс-инфрм , 2007. — 154 c.
ISBN 5-98322-263-5
Скачать (прямая ссылка): infekciivakusherstve2007.doc
Предыдущая << 1 .. 125 126 127 128 129 130 < 131 > 132 133 134 135 136 137 .. 250 >> Следующая

Не исключено, что местный 'иммунный ответ может в определенной степени нейтрализовать инфекционную активность С. trachomatis, поскольку уровень slgA в цервикальной слизи обратно пропорционален количеству хламидийных телец в половых путях (Материалы 4-го Европейского конгресса по хламидиям, 2000).
Высокий уровень slgA в секрете генитального тракта свидетельствует о хорошей защитной функции местного иммунитета.
Местный иммунитет при хламидийной инфекции в настоящее время вызывает особый интерес клиницистов и иммунологов, поскольку изучение его механизмов имеет большое значение для определения тактики ведения пациенток с различными формами урогенитального хламидиоза. Все чаще появляются данные об отличиях в характере течения хламидийной инфекции, особенностях диагностики, лечения в зависимости от «остроты» заболевания. Для оценки клинической симптоматики, выбора максимально информативных Методов диагностики и проведения адекватной терапии многими авторами Предлагается проведение дифференциальной диагностики между острым, хроническим и персистентным течением урогенитального хламидиоза.
А.В.Леонова и соавт. (2004) провели исследования по определению уровня IgМ, IgG, IgA в смыве вагинального секрета у пациенток с острым, хроническим и персистентым течением урогенитального хламидиоза.

222 Глава II
, . ч
Вагинально-цервикальный секрет для количественного определения Ig получали путем смыва выделений из шейки матки и влагалища в 10 мл стерильного 0,14 М забуференного физиологического раствора с рН 7,4. В полученный секрет добавляли 0,0196 NaN, затем его центрифугировали при 8000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость отбирали, и секрет хранили при —20°С до исследования. Материал забирали до лечения.
В цервикальной жидкости у всех пациенток определяли концентрации slgA, IgM, IgG и IgA методом сэндвич-ИФА. При постановке ИФА во все лунки 96-луночного плоскодонного полистирольного планшета («Биомедикал», Москва) помещали IgG-фракции AT, выделенные из козьих моноспецифических антисывороток к IgA, IgM, IgG, содержащих AT к тяжелой цепи соответствующего изотипа. Ig-фракции получали методом ионно-обменной хроматографии на ДЭДЭ-32-целлюлозе путем элюции AT из сывороток 0,02 М фосфатным буфером (рН 8,0).
IgA, IgM, IgG разводили 0,05 М карбонатным буфером (рН 9,5) до концентрации 10 мкг/мл, добавляли по 100 мкл во все лунки планшетов и инкубировали в течение 16 ч при 4°С. При определении slgA в планшеты помещали AT к IgA в концентрации 50 мкг/мл и также инкубировали в течение 16 ч при 4°С.
После инкубации AT планшеты трехкратно отмывали 0,14 М забуференного физиологического раствора (рН 7,4), содержащим 0,0596 твин-20, во все лунки добавляли эту жидкость по 100 мкл. Образцы секрета титровали с 1:2 до 1:256, а стандартные препараты — начиная с 1—4 мкг/мл. После этого планшеты помещали в термостат на 1 ч при 37°С. В качестве стандарта для определения IgM, IgG, IgA использовали пул сыворотки человека с известным содержанием Ig 3 изотипов, выраженным в мг на 1 мл; стандартом для определения slgA служил иммунохимически чистый slgA, выделенный из молозива. Все последующие стадии отмывки были аналогичны процедуре, описанной выше.
IgG, IgM, IgA и slgA в секретах определяли с помощью специфических конъюгатов собственного изготовления в разведениях соответственно 1:3200, 1:600, 1:400 и 1:400.
Конъюгаты готовили по методу M.Wilson и P.Nakane. Иммунную реакцию проявляли путем добавления в каждую лунку по 100 мкл субстратного буфера, представляющего собой смесь ортофенилендиамина с Н202, и последующей инкубацией планшета при комнатной температуре в течение 30 мин. Ферментативную реакцию останавливали добавлением в лунку 50 мкл H2S04. Интенсивность реакции учитывали на спектрофотометре с вертикальным лучом при длине волны 492 нм («Row»). Отрицательным контролем служили лунки первого ряда, содержащие все ингредиенты реакции, кроме исследуемых образцов. Удовлетворительным считали опыт, в котором оптическая плотность отрицательного контроля не превышала 0,2.
Следует отметить, что при определении slgA в качестве посадочных AT использовали AT к а-цепи IgA, которые взаимодействовали с молекулами IgA и slgA. При добавлении конъюгата к slgA происходило его взаимодействие только с молекулами slgA. При этом свободный sc, который мог присутстсво-вать в секрете, а также сывороточный IgA не определялись.
Количество Ig рассчитывали, используя универсальную компьютерную программу для ИФА, разработанную в лаборатории молекулярной иммунологии МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского. Для оценки содержания Ig в 1 мл ваги-нально-цервикального смыва полученные показатели увеличивали в 10 раз.
Под наблюдением находились 22 пациентки с диагнозом «урогенитальная монохламидийная инфекция». В результате проведенного комплексного обследования было выделено 3 группы.

Роль инфекции и факторов реактивности организма в клинике, диагностике и лечении
наиболее часто встречающихся воспалительных заболеваний женских половых органов 223
Предыдущая << 1 .. 125 126 127 128 129 130 < 131 > 132 133 134 135 136 137 .. 250 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed