Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови - Макацария А.Д.
ISBN 5-8249-0078-7
Скачать (прямая ссылка):
Определение активности отдельных компонентов системы гемостаза (антитромбииа III; плазминогена, а2-аититрипсииа, а2-макро-
352
глобулина, C-1-инактиватора, а2-антиплазмина; прекалликреина; протеина С ингибитора активатора плазминогена, уровня гепаринемии и др.) проводится с использованием т.н. хромогенных субстратов, специфичных к действию исследуемых протеаз или протеаз, инактивируемых ими, входящих в состав тест-системы. Результаты оцениваются по уровню высвобождаемого хромогенным субстратом паранитроанилина с помощью спектрофотометра (405 нм) и калибровочной кривой, построенной с помощью серийных разведений соответствующих стандартов.
Кроме тестов оценки ристомицин-кофакторной активности на агрегометре возможно использование отмытых донорских тромбоцитов с реактивом ристомицина и серийных разведений (от 1:1 до 1:160) исследуемой плазмы. Чувствительность тест-системы оценивается по отношению к аналогичным разведениям донорской плазмы.
6.3.1. Методы исследования фибринолитического
звена системы гемостаза
Определение активности плазминогена амидолитическим методом с помощью хромогенных субстратов и его концентрации в плазме с помощью иммунологических реакций (например, Mancini, 1966).
Оценка дефицита плазминогена с помощью пробы со стрептазой на тромбоэластографе (см. выше).
Определение времени лизиса эуглобулинового сгустка по методу Kovalsky (1959) характеризует содержание активаторов фибринолиза, содержащихся в эуглобулиновой фракции и имеет значение для общей характеристики тромбофилии при хронических формах ДВС-синдрома.
Содержание и активность ингибиторов фибринолиза: CC1 -антитрипсина, сс2-макрогло6улина, а2-антиплазмина, ингибитора активатора плазминогена (ПАП). Наиболее важное значение имеет определение а2-антиплазмина для дифференциальной диагностики причин первичного гиперфибринолиза, что исключает во многих случаях ДВС-синдром, как причину геморрагии.
Манжеточная проба. Определение комплекса плазмин-анти-плазмин (ПАП) - характеризует процесс образования неактивного комплекса плазмин-антиплазмин при вторичной активации фибринолиза при ДВС-синдроме и тромболитической терапии. Неспецифически характеризует масштабы активации внутрисосудистого свертывания крови (ДВС) и степень плазмчнемии - (тромболиз), а степени риска геморрагии, вызванных потреблением фибриногена, при тромболизе. В последнее время мониторинг за ПАП рассматривается как один из важных методов прогнозирования осложнений при злокачественных новообразованиях, таким образом имеет зна-
12 - 6578
353
чение при хронических формах ДВС-синдрома. Задачами прогнозирования нарушении адаптивных механизмов системы гемостаза во время беременности могут быть динамическая оценка реальной гиперактивностн тромбоцитарной функции, оценка ингибиторов свертывания крови и функциональные пробы фибринолитической системы, например, манжеточная проба. Обычное исследование фибринолитической активности крови у беременных практически во всех наблюдениях показало значительное снижение действия активаторов фибринолиза, содержащихся в эуглобулпновой фракции крови. Отсутствие достоверных различий отмечено и при оценке основного компонента фибринолитической системы - плазминоге-на, содержание которого у беременных достаточно высокое.
6.3.2. Выявление антифосфолипидных антител
Своевременная диагностика АФС является основой предотвращения тромботическнх осложнений. Тем не менее она не всегда доступна и требует глубокого понимания вопросов общей патологии и гемостазнологии. Лабораторная диагностика АФС не может быть отнесена к рутинным методам и требует строгой стандартизации, на что обращают внимание ведущие исследователи этой проблемы во всем мире.
Выявление АФА осуществляется как с помощью иммунологических методов (ELISA), так и с использованием фосфолипид-за-висимых коагуляционных тестов, направленных на детекцию BA. Методом выбора при определении антикардиолипиновых антител (АКА), по общему признанию является твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), при этом возможно определение идиоти-пов IgG1 M1 А. Частота идиотипов (поданным R.L. Bickeial п соавт.) представлена в таблице 43.
Таблица 43
Основные идиотипы AKA
36% имеют изолированный IgG_
17% имеют изолированный IgM_
14% имеют изолированный IgA__
33% имеют различные вариации__
Поскольку AKA связываются с фосфолипидами через ?2GPl, уже разработаны тест-системы, позволяющие прямо определять концентрацию анти-р2СР1-антител. Одновременно несколько исследовательских групп сообщи чи о тесной корреляции между уровнем анти-р2СР1-антител, уровнем AKA и тромбозами у пациентов с
354
АФС. В свяли с этим определение анти-р2СїР1 более предпочтительно, нежели антител непосредственно к АКА.
ELISA для АФА (кардио.шпнновый анапиз) предназначен для количественного измерения уровня АФА в сыворотке больных с использованием микротитровых плат, покрытых кардполипином или иным отрицательно заряженным фосфолипидом. В качестве фосфолипида используется преимущественно кардиолипин, но применяются и другие отрицательно заряженные фосфолипиды, такие как фосфатидил-серин, проявляющий сходную реактивность. Среды блокируются альбумином бычьей сыворотки или другим подходящим реагентом, затем добавляется сыворотка больного, разведенная в сыворотке фетальной икроножной мышцы или в бычьей сыворотке. Разбавитель для сыворотки больного должен содержать ?2GPl для максимального связывания антител с фосфолипидамп антигенов. Большинство тестовых реагентов в настоящее время содержат известные концентрации ?2GPl. После инкубационного периода среда промывается, и АФА определяют по маркированным IgG и IgM антителам.
