Радионуклидная диагностика для практических врачей - Лишманова Ю.Б.
ISBN 5-93629-166-9
Скачать (прямая ссылка):
При обработке полученных данных очень важно точно выбрать «рабочий» участок калибровочной кривой. Рабочий отрезок калибровочной кривой - наиболее линейная и стабильная ее часть, обеспечивающая максимальную точность анализов (в этих пределах кривой получают результаты с наиболее высокой воспроизводимостью).
Как правило, рекомендуют использовать участок между точками, имеющими следующие значения:
(В/Во) • 100% =20% и (В/Во) • 100% =80%.
Представляется самым оптимальным для выбора рабочего участка калибровочной кривой использовать более объективный критерий - коэффициент вариации. Для вычисления коэффициента вариации при построении калибровочной кривой для каждого стандарта необходимо, как минимум, три параллельные пробирки. Коэффициент вариации вычисляется для каждого стандарта с использованием следующих формул:
It(B-Вер)2 л _ і і_
KB = (8/В) • 100%,
где В — радиоактивность одной пробирки; 5 — среднее квадратичное отклонение; Вер — средняя арифметическая радиоактивность всех пробирок для данного стандарта; KB — коэффициент вариации.
Рабочим считается такой участок калибровочной кривой, на котором коэффициент
зо
Глава 2. РАДИОНУКЛИДНАЯ ДИАГНОСТИКА В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
вариации менее 10%. Использование коэффициента вариации позволяет более эффективно оценить качество РИА-набора и качество своей работы. Для наименьшего и наибольшего значений стандарта КВ=30%, поэтому предпочтительнее использовать «рабочий» участок калибровочной кривой. К сожалению, в кардиологии это не всегда удается. Например, у здоровых людей содержание миоглобина, MB-КФК и вазопрессина находится вблизи нулевого стандарта, а у больных с инфарктом миокарда уровень этих веществ нередко приближается к значениям максимального стандарта.
Другой очень важной проблемой для исследователя, имеющего дело с клиническим материалом, является максимальная воспроизводимость результатов при работе с разными РИА-наборами, так как при использовании клинического материала сформировать за короткий срок достаточно однородную выборку больных невозможно, а хранение сывороток в течение более чем одного месяца при температуре -20 °С не рекомендуется. Та же задача встает перед исследователем, которому необходимо оценить изменения уровня тех или иных биологически активных веществ в динамике заболевания. Для достижения максимальной воспроизводимости результатов необходимо всегда определять гормон в двух параллельных пробах, а калибровочную кривую строить как можно точнее и ближе к истинной калибровочной кривой для данного набора. Так как обработка всех полученных результатов производится по калибровочной кривой, то малейшая ошибка в ее построении неминуемо отразится на всех данных. Добиться повышения точности в построении калибровочной кривой можно с помощью увеличения числа параллельных проб для одного и того же стандарта. Однако число параллельных стандартов в наборе нельзя увеличивать до бесконечности, так как по мере увеличения расхода реактивов при построении калибровочной кривой уменьшается количество неизвестных проб, которые могут быть определены с помощью данного набора. Наиболее рационально использование трех параллельных проб для каждого стандарта.
Важное значение имеет использование контрольных сывороток, при этом идеальным представляется применение трех контрольных сывороток с высоким, средним и низким значениями определяемого лиганда, что позволяет провести контроль качества стандартной кривой не только для «рабочего» участка, но и для участков с высокими значениями коэффициента вариации. Для приготовления стандартных сывороток необходимо собрать такое количество материала, чтобы его хватило, как минимум, на год работы. Трудность заключается в приготовлении сывороток с высокими значениями определяемого лиганда. Для получения таких сывороток необ-
ходим чистый гормон. Рекомендуется хранить стандартные сыворотки при -70 °С или добавлять в сыворотки азид натрия (препарат, обладающий мощным бактерицидным действием и не влияющий на результаты радиолигандного анализа) в конечной концентрации 0,02%, разливать сыворотки на аликвоты и подвергать их лиофильной сушке. Для систематической работы необходимо предварительное определение интересующего лиганда в контрольной сыворотке не менее чем в 10 параллельных пробах с последующим определением средней арифметической. В дальнейшем при систематической работе контрольную сыворотку достаточно определять в трех параллельных пробах.
Таким образом, контроль качества РИА-анализа в лаборатории должен быть двойным: следует контролировать качество поступающих РИА-наборов и качество собственной работы. Для систематической проверки качества РИА-набора можно ограничиться тремя показателями:
- величиной неспецифического связывания (НСВо/Т)х100%;
- величиной связывающей способности антител (Во/Т) X 100%;
- величиной интерсепта, т.е. количества определяемого вещества для (НСВо/Во) х 100% = 50%.
Обычно величина интерсепта должна соответствовать одной и той же средней концентрации с коэффициентом вариации менее 2%. Качество работы оценивается по контрольным сывороткам.
