Антигельминтики: фармакология и применение - Архипов И.А.
ISBN 978-585941-305-8
Скачать (прямая ссылка):
- 121,743 нг/г разработан С.Н. Максименко (2007). Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью ±5 % при доверительной вероятности - 0,95. Метод основан на извлечении албендазола и албендазола сульфоксида из гомогена-та анализируемых проб этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в системе ацетонитрил - гексан и количественном определении методом жидкостной хроматографии высокого давления.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы. Средства измерения: жидкостной хроматограф высокого давления Helwett-Packard 1090 с диодно-матричным детектором, управляемым при помощи 79994A Chem Station; весы аналитические 2-го класса точности, ГОСТ 24104-88; весы микроаналитические, точность взвешивания до 4-го десятичного знака, Chen (США) или аналогичные; автоматические пипетки, ТУ 64-1-3329-81; колбы мерные вместимостью 100 мл, ГОСТ 1770-74; шприц Гамильтона (Швейцария).
122
Вспомогательные устройства: холодильник; роторный испаритель; сушильный шкаф; цилиндрические пробирки с притертой пробкой емкостью 50 мл; круглодонные колбы емкостью 25 и 50 мл; пробирки на конус (Эппендорфа на 1 или 0,5 мл); стандартные образцы албендазола фирмы Invesa. Активность 99,7 %.
Реактивы: этилацетат х.ч.; ацетонитрил х.ч.; гексан х.ч.; диме-тилформамид (ДМФА) х.ч.; сульфат натрия (Na2SC>4) безводный.
Требования безопасности:
1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88;
2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76;
3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы с химическими реагентами и на жидкостном хроматографе.
Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха 20±10 °С, атмосферном давлении 84-106 кПа и влажности воздуха не более 80 %. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
Стандартный раствор албендазола с концентрацией 20000 нг/см (раствор № 1) готовят путем растворения точной навески стандартного образца в диметилформамиде. Раствор хранится в течение 14 сут в холодильнике. Рабочие стандартные растворы албендазола готовят путем последовательного разведения диме-тилформамидом до концентраций 10000, 5000, 2500, 1000, 500 нг/мл.
Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по зксплуатации.
Параметры хроматографирования: Жидкостной хроматограф высокого давления Helwett-Packard 1090 с диодноматричным детектором, управляемым при помощи 79994А ChemStation. Элюент: ацетонитрил/аммонийно-ацетатный буфер (40/60). Колонка хроматографическая: Micra С 18 ODS (2,0x40,0 мм) с размером сорбента 1,5 (um. Скорость протекания элюента -1,0 мл/мин. Давление: 16,2 МПа. Объем вводимой пробы - 0,050
123
мл. Длина УФ-волны детектирования: 290 нм. Время удерживания албендазола: - 7,5 мин. Время удерживания албендазола сульфоксида: ~ 6,5 мин.
Статистическая обработка результатов анализа проб печени и почек. По результатам анализа стандартных концентраций албендазола построили график зависимости площади пика от концентрации (рис. 6.1.).
Площадь пика, mVxS Концентрация, нг/см
421,043 20000
198,804 10000
123,001 5000
53,454 2500
18,166 1000
12,872 500
0 0
Рис. 6.1. Площадь пика-концентрация (стандартные растворы)
В результате было получено следующее уравнение, отражающее данную зависимость:
124
Y= 47,526 x X
Для определения процента извлечения албендазола в образцы, отобранные от животных контрольной группы, искусственно внесли стандартные растворы албендазола и албендазола сульфоксида из расчета 2500 нг/г биосубстрата. Результаты анализа данных образцов приведены в таблице 6.1.
6.1. Степень извлечения албендазола из экстрактов печени и почек
Биосубстрат Площадь пи Площадь пи Извлечение,
с албендазо- ка стандарта ка албенда %
лом албендазола зола
в экстракте
Печень 53,454 42,528 79,56
Почки 43,907 82,14
Подготовка проб к определению. Экстракция и очистка экстрактов, органы и ткани. До проведения анализа пробы хранят при - 20 °С. Анализируемую пробу животной ткани (печень, легкие, сердце, мышцы и др.) размораживают, измельчают тщательно ножницами, взвешивают и переносят в цилиндрическую пробирку с притертой пробкой, добавляют 20-30 мл этилацетата и оставляют на 10—12 ч. Затем экстракт переносят через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия в круглодонную колбу. Навеску пробы заливают второй порцией этилацетата (10-20 мл) и оставляют на 1 ч при периодическом встряхивании, экстракт также переносят через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия в круглодонную колбу.
