Справочник по производству спирте. Сырье, технология и технохимконтроль - Яровенко В.Л.
Скачать (прямая ссылка):
Для получения препарата Амиломезентерии Гх-467 применяется также глубинный способ выращивания продуцента Вас. mesen-tericus ПБ-467 на жидкой питательной среде с интенсивной аэрацией.
Процесс получения культуры включает приготовление посевного материала и выращивание производственной культуры Вас. те-sentericus ПБ-467.
Приготовление посевного материала. Ампулы с хранящейся в песке культурой Вас. mesenlericus ПБ-467 поступают на завод из ВНИИПрБ. На каждой ампуле должна быть этикетка с названием культуры, датой начала хранения и подписью микробиолога.
Для оживления культуры используют мясо-пептопный бульон (МПБ), который разливают в конические колбы объемом 750-1000 мл в количестве 75-100 мл. Колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре 120° С в течение-30 мин, затем выдерживают в термостате при температуре 37+0,5° С в течение суток.
В приготовленный таким образом МПБ в стерильном боксе переносят стерильно содержимое ампулы с культурой. Выращивание осуществляется в термостате при температуре 40±0,5° С в течение 40-48 ч. На поверхности бульона образуется белая складчатая пленка. Бульон должен оставаться прозрачным, однако возможно слабое хлопьевидное помутнение.
Оживленная на МПБ культура может храниться при 4-60C в течение 10 дней, при 200C - ие более 3 сут.
Для проверки культуры на чистоту используют мясо-пептон-ный агар (МПА). Стерильный МПА разливают в стерильные чашки Петри и помещают их на сутки в термостат при температуре 37± ±0,5° С. Убедившись в стерильности МПА в чашках, его используют для работы.
Оживленную культуру петлей стерильно переносят в пробирку со стерильной дистиллированной водой, энергично встряхивают 5- 10 мин и отбирают стерильной пипеткой 0,2-0,3 мл в чашку Петри, размазывая среду стерильным шпателем по поверхности МПА.
Чашки со средой выдерживают в термостате при температуре 40±0,5°С в течение 24-40 ч. На поверхности МПА должны вырасти только колонии микроорганизмов, характерные для Вас. mesentericus. Присутствие другой микрофлоры свидетельствует о нестерильности посуды или оживленной культуры. Такую культуру нельзя использовать для производства. Колбы следует простерилизовать при температуре 127° С в течение 2 ч.
Посевной материал выращивают поверхностным способом на жидких питательных средах. Посевным материалом для ферментации может служить оживленная на МПБ культура, которая прошла проверку на чистоту.
Для получения посевного материала используется солодовое сусло с концентрацией CB 8-12% и рН 7,3 (доводится 33%-ным раствором NaOH). Солодовое сусло разливают в конические колбы объемом 750-1000 мл в количестве 75-100 мл, колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при температуре
HO0C1 давлении 0,15 МПа в течение 30 мин. Затем колбы помещают на сутки в термостат при температуре 37±0,5° С. Выдержанное стерильное сусло должно быть прозрачным и ие иметь на поверхности пленки микроорганизмов,
Засев питательной среды культурой Вас. mesen-tericus осуществляется следующим образом. В стерильном боксе оживленную культуру петлей стерильно переносят на поверхность питательной среды (для засева достаточно 1-2 петель). Колбы с за-севной средой не рекомендуется взбалтывать. Посевной материал выращивается в термостате при температуре 40 + 0,50C в течение 24 или 40 ч. Культура на солодовом сусле вырастает в виде белой складчатой бархатистой пленки.
Микробиологический контроль посевного материала заключается в проверке его на чистоту и на отсутствие бактериофага. Проверка посевного материала на чистоту проводится тем же способом, что и проверка оживленной культуры. Результаты проверки должны удовлетворять требованиям, предъявляемым к оживленной культуре.
Проверка на отсутствие бактериофага производится следующим образом. Посевной материал петлей (1 раз) стерильно переносят в пробирку со стерильной дистиллированной водой. Пробирку энергично встряхивают в течение 5-10 мин, после чего из нее отбирают 0,2-0,3 мл среды и переносят в чашку Петри с чистой культурой Вас. mesentericus иа МПА. Испытуемый посевной материал шпателем тщательно размазывают по всей поверхности. Инкубацию культуры осуществляют в термостате при температуре 40±0,5°С в течение 24 ч. После инкубации на чашках Петри с чистой культурой не должны выявляться фагоцитозные пятна, которые указывают на лизис бактерий бактериофагом.
Посевной материал, проверенный на чистоту и отсутствие бактериофага, используется для засева питательной среды в производственном ферментаторе. До засева посевной материал желательно не взбалтывать и хранить при температуре 4-6° С.
Выращивание производственной культуры. Технологический цикл состоит из следующих операций: подготовка ферментатора, приготовление и стерилизация питательной среды, стерилизация пеногасителя, стерилизация воздуха, засев питательной среды в ферментаторе, ферментация.
Подготовка ферментатора осуществляется так же, как и при производстве Глюкаваморина Гх-466.
Выращивание культуры Вас. mesentericus ПБ-467 в производственных ферментаторах проводится на питательной среде следующего состава (в %):
