Справочник по производству спирте. Сырье, технология и технохимконтроль - Яровенко В.Л.
Скачать (прямая ссылка):
Приготовление раствора серной кислоты 1 :4. К четырем объемам дистиллированной воды приливают один объем серной кислоты.
Приготовление 0,1 и. раствора гидроксида натрия или гидроксида калия. 4 г гидроксида натрия или 5,6 г гидроксида калия растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 мл и объем доводят до метки.
Приготовление 1 н. раствора соляной кислоты. 82,2 мл соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 мл н объем доводят до метки.
Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 6,0. Раствор готовят смешиванием девяти объемов раствора А (9,077 г гидроортофосфата калия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 мл, объем доводят до метки дистиллированной водой) и одного объема раствора Б (23,883 г дигидроорто-фосфата натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 мл, объем доводят до метки дистиллированной водой).
Приготовление основного раствора ферментных препаратов. Для приготовления технических ферментных препаратов (поверхностных культур, выращенных на отрубях или других плотных питательных средах) 1 г исследуемой культуры взвешивают иа технических весах с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 200-300 мл, приливают (пипеткой) 100 мл дистиллированной воды и настаивают 1 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая. Через 1 ч раствор фильтруют через складчатый бумажный фильтр.
Для приготовления о.чищенных ферментных препаратов 0,1 г исследуемого препарата взвешивают на аналитических весах в стаканчике вместимостью 25-30 мл. Навеску тщательно растирают стеклянной палочкой с небольшим количеством воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и при необходимости фильтруют.
Раствор ферментных препаратов может храниться в течение суток прн температуре от +2 до -4° С.
Проведение испытания. При определении осахарива-ющей активности в культурах и препаратах Aspergillus oryzae в коническую колбу вместимостью 50 мл вводят пипеткой 20 мл 1%-ного раствора крахмала н погружают колбу в водяную баню с температурой 30+0,2° С. Через 10 мнн в колбу добавляют от 1 до 10 мл ферментного раствора и тщательно перемешивают. Общий объем реакционной смеси должен быть 30 мл. Если на определение берут меньше 10 мл ферментного раствора, недостающий объем дополняют дистиллированной водой, которую вводят непосредственно перед добавлением ферментного препарата.
Через 10 мин после добавления ферментного раствора действие фермента приостанавливают добавлением 2 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Для определения количества образовавшихся редуцирующих углеводов содержимое колб после осахариваиия количественно переносят в коническую колбу вместимостью 300-400 мл, туда же добавляют пипеткой 20 мл 0,1 н. раствора йода и 60 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрня или калия (гидрокенд приливают по каплям прн перемешивании).
Колбу накрывают часовым стеклом и оставляют на 15 мин в защищенном от света месте. Через 15 мин в раствор вводят 2 мл разбавленной серной кислоты (1:4) и титруют выделившийся йод 0,1 н. раствором тиосульфата.
Одновременно ставят контрольный опыт в конической колбе с теми же количествами всех реагентов, только ферментный раствор вводят после добавления 2 мл 1 н. раствора соляной кислоты (без выдержки в водяной бане).
Расхождение между результатами титрования контрольного и опытного растворов должно составлять 0,5-6,0 мл 0,1 и. раствора тиосульфата. Если расхождение меньше 0,5 или больше 6 мл, то анализ повторяют с большим или меньшим количеством ферментного раствора.
При определении осахаривающей активности в культурах н препаратах Aspergillus awamori проводятся те же операции, только для прекращения ферментативной реакции добавляют 5 мл 1 н. раствора соляной кислоты, а для определения количества редуцирующих Сахаров при тщательном перемешивании сначала добавляют 3 мл 0,1 н. раствора йода, а затем 60 мл 1 н. раствора гидроксида натрия.
При определении осахаривающей активности в культурах и препаратах Bacillus subtilis в качестве буферного раствора используют фосфатный буферный раствор с рН 6,0 для приготовления 1%-ного раствора крахмала (в 100 мл раствора крахмала должно быть 10 мл фосфатного буферного раствора); после введения 20 мл 0,1 н. раствора йода добавляют 52,5 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия или калия.
19*
291
Поскольку соотношения между количествами введенного препарата и гидролизованиого крахмала не подчиняются известным кинетическим закономерностям, на основании многочисленных экспериментальных данных разработана градуировочная кривая, при помощи которой все найденные величины скорости реакции пересчитаны на начальную (в пределах 4-25% гидролиза глюкозидных связей крахмала).
Обработка результатов. Осахаривающую активность ОС (в ед./г) в культурах и препаратах Aspergillus oryzae определяют по формуле OC=e/(mt),
в культурах и препаратах Aspergillus awamori - по Формуле OC=(K-О) •50/("O,
Таблица 88
ПЕРЕВОД КОЛИЧЕСТВА 0,1 н. РАСТВОРА ТИОСУЛЬФАТА В ЕДИНИЦЫ ОС
