Справочник по производству спирте. Сырье, технология и технохимконтроль - Яровенко В.Л.
Скачать (прямая ссылка):
Приготовленные питательные среды МПА, сусло-агара, картофельного агара разливают в стерильные чашки Петри слоем 2-3 мм, дают застыть агару н затем для проверки бактериальной стерильности среды выдерживают эти чашки в термостате прн 37° С в течение 24 ч. После этого чашки Петри с питательной средой, в которых отсутствуют колонии микроорганизмов, готовы к высевам проб.
Для определения бактериологической чистоты ферментного препарата 1 г препарата (по разности масс стерильной пробирки с препаратом до и после отбора образца) всыпают в стерильную колбу с 99 мл стерильной воды, закрывают ватной пробкой и тщательно перемешивают до практически полного растворения не менее 10 мин - это соответствует разведению 102. Затем стерильной пипеткой из этой колбы отбирают 1 мл раствора и вводят в пробирку с 9 мя стерильной воды и тщательно перемешивают - это соответствует разведению 103. Затем 1 мл из последней пробирки стерильной пипеткой переносят в следующую пробирку с 9 мл стерильной воды--это соответствует разведению 104.
Из приготовленных пробирок с разведениями 102, 103 и 104 делают параллельные высевы (из каждой пробирки) на шесть чашек Петри со стерильной питательной средой (МПА). Для этого стерильной пипеткой у пламени горелки отбирают 0,5 мл раствора и переносят на поверхность среды в чашки Петри, тщательно распределяя его по всей поверхности. Засеянную среду помещают в термостат при температуре 37° С на 24 и 48 ч. Через 24 ч подсчитывают количество выросших бактериальных колоний.
Затем чашки Петри оставляют в термостате еще на 24 ч для выявления медленно растущих бактериальных колоний. Для подсчета их количества берут чашки, число колоний на которых подтверждается смежными разведениями. Допускаемые расхождения при подсчете колоний на чашках со смежными разведениями - не более чем в 2 раза. Для расчета берут среднее количество колоний, выросших на шести чашках. Количество микроорганизмов х в 1 г препарата в колониях определяют по формуле х=АВ/(0,5С), где А - среднее число колоний, выросших на чашках Петри; В - разведение препарата; 0,5 - количество пробы, взятое для высева, мл; С - навеска препарата, г.
Для проверки отсутствия в препарате конидий гриба-продуцен-Ta все операции по взвешиванию препарата, посеву н подсчету ко-
лоний проводят так же, как при определении количества бактериальной флоры. При определении количества конидий гриба-продуцента питательной средой является сусло-агар. Чашки Петри после высева проб выдерживают в термостате при 28-30° С в течение 48 ч, после чего подсчитывают выросшие конидии гриба-продуцента.
Определение ферментативной активности
Определение амилолнтической активности (АС). Определение ведется по ГОСТ 20264.4-74. Метод основан на гидролизе крахмала ферментами амилолитического комплекса до декстринов различной молекулярной массы.
Амилолитическая активность характеризует способность амило-литических ферментов катализировать гидролиз крахмала до декстринов различной молекулярной массы и выражается числом единиц указанных ферментов в 1 г препарата.
За единицу активности амилолитических ферментов принято такое их количество, которое в строго определенных условиях температуры, рН и времени действия катализирует превращение 1 г растворимого крахмала до декстринов различной молекулярной массы.
Приготовление 1%-ного раствора крахмала (субстрат). 1 г растворимого картофельного крахмала с учетом влажности помещают в мерную Колбу вместимостью 100 мл, добавляют 25 мл воды и перемешивают до исчезновения комочков. Затем добавляют в колбу еще 25 мл воды, помещают колбу с содержимым в кипящую водяную баню и выдерживают в ней при непрерывном перемешивании до полного растворения крахмала. После этого содержимое колбы охлаждают, добавляют 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 4,7 (для препаратов грибного происхождения) или фосфатного буферного раствора с рН 6,0 (для препаратов бактериального происхождения), объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой и содержимое колбы перемешивают. Полученный субстрат после реакции с йодом должен иметь окраску, оптическая плотность которой ие менее 0,70. Его можно использовать в течение 10 сут при условии хранения в холодильнике. В этом случае каждый день перед использованием субстрат нагревают в кипящей водяной бане в течение 5-10 мин.
Приготовление ацетатного буферного раствора с рН 4,7. Ацетатный буферный раствор с рН 4,7 готовят смешиванием равных объемов растворов А (58 мл ледяной уксусной кислоты наливают в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем дистиллированной водой до метки) и Б (82 г ацетата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят объем дистиллированной водой до метки).
Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 6,0. Фосфатный буферный раствор готовят смешиванием 1 объема раствора А (11,876 г гидроортофосфата натрия растворяют в дистиллированной воде и объем доводят до 1000 мл) и 9 объемов раствора Б (9,078 г дигидрофосфата калия растворяют в дистиллированной воде и объем доводят до 1000 мл).
