Лабораторный практикум по общей технологии пищевых производств -
ISBN 5-10—002282—5
Скачать (прямая ссылка):
Биуретовый реактив — 15 см3 10 н. раствора KOH и 25 г сегнетовой соли, взятой ' с погрешностью ±0,01 г, растворяют пример-по в 900 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3. Медленно добавляют при постоянном перемешивании 30 см3 4 Мойого раствора CuSO4, отмеренных цилиндром, и доводят объем колбы до метки дистиллированной водой. Техника определения — завешивают около 1,5 г муки с погрешностью ±0,001 г и помещают в сухую коническую колбу вместимостью 250—300 см3, снабженную пробкой. Отмеривают цилиндром с ценой деления 0,1 см3 под тягой 2 см3 четыреххлори-стого углерода для извлечения жира из образца, добавляют пипеткой 100 см3 биуретового реактива. Закрытую пробкой колбу встряхивают на механическом встряхивателе в течение 60 мин. Далее вытяжку центрифугируют в течение 10 мин при частоте вращения 4500 мин-1. Прозрачный центрифугат помещают в кюветы фотоэлектроколориметра с толщиной слоя раствора 5 мм. Измерение оптической плотности производят при длине волны 550 нм. .
П© величине оптической плотности белковой вытяжки определяют содержание белка в иавеске (.мг) с помощью калибровочной кривой (рис. 6).
Рассчитывают массовую долю белка (в %) на сухие вещества муки.
Запись в лабораторном журнале
Масса муки (т) г
Величина оптической плотности (D)
Содержание белка в навеске муки (по кали- г
бровочной кривой) (л/1000)
Массовая доля белка в муке (AJi) %
Массовая доля белка в 100 г сухих веществ %
(M)
Заключение
Построение калибровочной кривой — для построения калибровочной кривой подбирают образцы муки с различной массовой долей белка в диапазоне, встречающемся в ре-
альных условиях (от 8 до 20%). Интервал в содержании белка образцов должен находиться в пределах не более 1%. Количество образцов не должно быть менее 10. С увеличением их числа точность определений возрастает.
Затем приведенным выше методом Дженнингса определяют оптическую плотность белковых вытяжек всех образцов.
При построении кривой на оси абсцисс откладывают величи-. ны оптической плотности, а на оси ординат—содержание белка в навеске в мг.
Определение массовой доли белка иефелометрическим методом. Метод основан на измерении интенсивности светового потока, рассеянного твердыми или коллоидными частицами, находящимися в растворе во взвешенном состоянии. По интенсивности светорассеяния, определяемой нефелометром, судят о концентрации исследуемого вещества.
В настоящее время находят широкое использование фотоэлектрические нефелометры.
Растворы высокомолекулярных соединений, например растворы белков, способны при определенных условиях в присутствии некоторых химических реагентов опалеоцировать. Одним из таких реагентов является сульфосалициловая кислота. Концентрация белка в этом случае может быть определена по интенсивности опалесценции.
Продукты гидролиза белка—пептоны, аминокислоты и другие азотсодержащие вещества — не опалесцируют.
Экспериментальной проверкой установлено, что нефелометрический метод с использованием сульфосалициловой кислоты отличается быстротой, высокой точностью, простотой и хорошей корреляцией с методом Кьельдаля.
Техника определения — около 0,5 г исследуемой муки взвешивают с погрешностью ±0,001 и помещают в коническую колбу вместимостью 250—300 см3, снабженную пробкой. В колбу добавляют из бюретки 50 см 0,05 н. раствора гидроксида натрия. Закрытую пробкой колбу встряхивают на механическом Встряхи-вателе в течение 15 мин. Затем вытяжку центрифугируют 10 мин при частоте вращения 6000 мин-1. 5 см3 прозрачного центрифуга-та пипеткой переносят в мерную колбу на 50 см3 и содержимое колбы доводят до метки сульфосалициловой кислотой.
При нефелометрическом анализе получение правильных результатов в значительной мере зависит от методики получения суспензии, в частности от порядка смешивания растворов, скорости смешивания. Поэтому после добавления сульфосалициловой кислоты колбу быстро переворачивают 2—3 раза (не более), раствор наливают в кювету с толщиной слоя 5 мм и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны
WS
g"S5 І1
Oi BS
!75
о 65
»55
'45
0.15 D.Z3 0,3t
Оптическая плотность
033
550 нм. Замеры следует производить сразу после добавления кислоты, так как частицы белка быстро агрегируют.
Массовую Долю белка определяют по калибровочной кривой (рис. 7). Построение ее ведут так же, как и при биурето-вом методе.
Запись в лабораторном журнале аналогична записи, данной к биуретовому методу. По полученным данным делают заклю-
Рис. 7. Калибровочная кривая для определения массовой доли белка чєниє.
нефелометрическим метолом Определение массовой доли
белка методом Лоури. Метод Лоури основан на реакции реактива Фолина с фенольяыми радикалами некоторых аминокислот, входящих в состав белков, в результате которой образуется соединение, придающее синюю окраску раствору белка. Интенсивность окрашивания зависит от массовой доли белка в исследуемом объекте. Метод обладает высокой чувствительностью и позволяет определять содержание белка при концентрации его в растворе от 10 до 100 мкг.
