Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Минеев В.Г. -> "Практикум по агрохимии - 2-е изд." -> 159

Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.

Минеев В.Г., В.Г.Сычев, O.A. Амельянчик, Т.Н. Болышева, Н.Ф. Гомонова, Е.П. Дурынина, B.C. Егоров, Е.В. Егорова, Н.Л. Едемская, Е.А. Карпова, В.Г. Прижукова Практикум по агрохимии - 2-е изд.: Учебное пособие — M.: Изд-во МГУ, 2001. — 689 c.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка): prak_agrochem.pdf
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 299 >> Следующая

366
Извлечение белков водой.
Навески заливают небольшими порциями ледяной воды (3, 3 и 4 CMj) и растирают после добавления каждой порции воды по песочным часам 3 мин до сметанообразного состояния. Можно добавить стеклянный или кварцевый песок. Навески растертой муки количественно переносят в центрифужную пробирку, используя 30 см3 ледяной воды.
Ступку и пестик обмывают водой, смывая ее в центрифужную пробирку. Все растворы центрифугируют в одном режиме 15 мин. при 5-1 ООО об/мин, при t = +3-5°С (при более низких температурах замерзает надосадочная жидкость). Надосадочную жидкость сливают в мерную колбу на 200 см3 через воронку с ватным тампоном.
Воду 30 см3 заливают в центрифужную пробирку, вставляют туда стеклянную палочку с резиновым наконечником и извлекают белки на ротаторе в течение 15 мин, затем центрифугируют. Извлечение белка из навески продолжают, добавляя еще дважды по 30 см3 ледяной воды, извлекают на ротаторе и центрифугируют. При всех дальнейших экстракциях палочка остается в пробирке. Все супернатанты сливают вместе в мерную колбу, доводят до метки водой и определяют в фильтрате (раствор I) белок по Лоури или азот по Кьельдалю с последующим пересчетом азота на белок.
Извлечение белков солевым раствором Осадок в центрифужной пробирке заливают 30 см3 5%-го раствора сернокислого калия. Извлечение на ротаторе проводят в течение 4 мин с последующим центрифугированием. Извлечение повторяют еще дважды, добавляя каждый раз по 30 см" солевого раствора, затем осадок в пробирке промывают холодной дистиллированной водой, добавляя 40 CMJ воды. Промывку водой проводят в течение 10 мин на ротаторе и затем центрифугируют в предложенном режиме.
Солевые и водный растворы сливают вместе в мерную колбу на 100 см", где раствором сернокислого калия доводят до метки. Получаем солевой раствор (II). Его используют для количественного определения глобулинов. Для этого определяют непосредственно белок по Лоури или сжигают 50 см" раствора, определяют азот по Кьельдалю и пересчитывают на белок.
Извлечение белков спиртом
Спирт 70°-й извлекает из навески спирторастворимые белки -проламины. Осадок в центрифужной пробирке заливают 35 см" этанола, перемешивают стеклянной палочкой. Палочку обмывают небольшой порцией спирта из пипетки и вынимают. Пробирки закрывают маленькими воронками или часовыми стеклами и выдерживают на водяной бане 30 мин при t = 80°С, обеспечивая слабое кипение спирта.
Содержимое пробирок охлаждают до комнатной температуры и центрифугируют при тех же условиях. Извлечение белков повторяют еще
367
два раза, добавляя 30 и 20 CMj спирта и экстрагируя белок при нагревании. При испарении спирта добавляют в пробирку спирт из пипетки, сохраняя указанный объем. При установке в центрифугу пробирки уравновешивают спиртом. Надосадочную жидкость собирают в мерную колбу на 100 см3. Доводят объем до метки спиртом.
При доведении объема водой возможно появление в колбе мути, так как белковые молекулы сорбируют воду, слипаются и выпадают в осадок. Чтобы раствор при этом оставался прозрачным, в колбу добавляют 2-5 см3 0,2%-го раствора едкого натра. Остаток спирта в центрифужной пробирке после извлечения белков удаляют высушиванием под тягой. В растворе (III) определяют количество спирто-растворимых белков по Лоури.
Извлечение белков щелочью
Осадок в центрифужной пробирке обрабатывают 40 см3 0,2%-го раствора NaOH и растирают стеклянной палочкой. При этом извлекаются глютелины. Извлечение проводят на ротаторе в течение 10 мин, извлечение повторяют еще дважды, добавляя в пробирку по 30 см3 раствора щелочи. Каждый раз центрифугируют в предложенном режиме.
Затем осадок промывают водой (30 см3) и в том же режиме центрифугируют. Супернатант и промывные воды собирают в мерную колбу на 200 см3 для количественного определения щелочерастворимых белков - глютелинов (раствор IV).
Определение небелкового азота
Небелковый азот составляет не более 10 - 12% от общего содержания азота в зерне. Небелковые формы в виде нитратного, аммиачного азота и азота свободных аминокислот переходят в водную вытяжку при анализе фракций. В связи с этим ее можно использовать для анализа небелкового азота.
100 CMj водной вытяжки помещают в коническую колбу на 200 ш\ приливают 10 см3 50%-й трихлоруксусной кислоты для осаждения белков, осадок оставляют на один час, фильтруют через рыхлый фильтр.
50 см3 фильтрата, который содержит смесь небелковых форм азота, помещают в колбу Кьельдаля, упаривают на электронагревателе до 10 CMj, приливают 5-7 см3 концентрированной серной кислоты и сжигают на плитке. Азот определяют впоследствии колориметрически по Несслеру или отгоняют по Кьельдалю. Разведение вытяжки учитывается при расчете результатов.
Количественное определение белка фракций Содержание белка в водной, солевой, спиртовой и щелочной вытяжке можно определить двумя методами:
1) непосредственно, окрашивая белки по Лоури реактивом Фолина. Интенсивность окраски измеряют на фотоколориметре с красным светофильтром или на спектрофотометре при 750 нм;
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 299 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed