Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
Сжигание ведут до тех пор, пока раствор в колбе совершенно не обесцветится. Обычно озоление органического вещества происходит за 3 - 8 ч в зависимости от вида материала, навески и интенсивности нагревания. Содержимое колбы Кьельдаля после окончания сжигания переносят количественно в отгонную колбу аппарата Кьельдаля и проводят отгон аммиака.
364
Расчёт
Содержание белкового азота: N [%] = ~ ~—„ "fnnn-,
Л •IUUU
где: а - объём кислоты в приёмнике, см3; н.к - нормальность кислоты, мгэкв, Ъ - объём щёлочи, израсходованный на титрование, см3; н.„, -нормальность щёлочи, мгэкв; 14 - атомная масса азота; H - навеска, г; 1000 - коэффициент пересчёта мг в г.
Реактивы
1. 50%-й раствор трихлоруксусной кислоты, 2%-й раствор ТХУ.
2. Реактив Гроака, смешанный индикатор, при pH 5,5 - чёткое изменение фиолетового цвета на зелёный.
3. Катализаторы:
а) металлический порошок селена - 0,05 г;
б) сернокислый калий, сернокислая медь и др.
Количественное определение белковых фракций в зерне (по Ермакову—Дурыниной)
Биологическая ценность растительных белков во многом зависит от состава и соотношения белковых фракций, которые извлекают различными растворителями. Суммарный белок разделяют на альбумины, глобулины, проламины, глютелины. Главнейшие таксоны культурных растений характеризуются специфическим соотношением этих фракций. Известно, что биологическое и технологическое качество пшеницы в основном определяется проламинами и глютелинами, а у зернобобовых культур проламины почти отсутствуют. Интерес к анализу белковых фракций в основном определяется тем фактом, что по соотношению фракций можно косвенно оценивать аминокислотный состав данного белка, не переходя к анализу аминокислот.
Установлено, что сумма незаменимых аминокислот выше в альбуминах и глобулинах; проламины пшеницы и особенно кукурузы не содержат крайне важных для человека и животных лизина, метионина, триптофана, что снижает биологическую ценность этой фракции. Все процессы созревания и налива зерна тесным образом связаны с изменением соотношения белковых фракций, обычно снижается в белке доля низкомолекулярных белков альбуминов и глобулинов и увеличивается доля проламинов и глютелинов.
Азот минеральных удобрений, внесенный в виде подкормки, в основном переходит в белок спирторастворимой фракции.
Аминокислотный состав белка под влиянием удобрений и других факторов не меняется, но сумма незаменимых кислот может возрастать и снижаться за счет различного соотношения фракций.
Недостаток незаменимых аминокислот в кормах восполняется за счет их микробного и промышленного синтеза, а также за счет выведения
365
сортов и линий кукурузы, пшеницы, ячменя со сбалансированным аминокислотным составом.
Влияние агрохимических приемов и почвенно-климатических условий на фракционный и аминокислотный состав растений оценивается методом фракционного анализа белка, предложенного Ермаковым и модифицированного впоследствии многими авторами. Метод позволяет анализировать в основном белки семян.
Экстракция белков из вегетативных органов растений производится при помощи буферных растворов, при этом обеспечивается получение экстрактов в мягких условиях, сохраняется структура белковых молекул. Белки извлекаются различными растворителями, применяемыми в одинаковой последовательности: ледяная вода; 5%-й раствор K2SO4; 70°-й раствор этанола; 0,2%-й NaOH. В первую вытяжку переходят водно-растворимые белки - альбумины, а также небольшое количество глобулинов, поскольку водный экстракт содержит растворимые соли, а также небелковые азотистые соединения и свободные аминокислоты. Долю извлекаемых глобулинов можно снизить за счет низкой температуры воды. Полнота извлечения каждой фракции достигается 3-4-кратной обработкой навески соответствующим экстрагентом.
Одновременно в исходном образце муки или зерна определяют содержание общего и белкового азота. При расчете результатов сумма азота фракций или сумма белковых фракций должны составить не менее 90% от общего содержания белка или азота.
Подготовка навески: для выделения белков из семян их тонко размалывают, при необходимости обезжиривают и растирают в фарфоровой ступке. При анализе целых семян дроблению и растирке также подвергаются и отруби; при анализе только эндосперма отруби отбрасываются, пропусканием материала на сите 0,2 мм или берется мука соответствующего выхода.
Навески семян обезжиривают петролейным эфиром или авиабензином после размола на мельнице из расчета 0,5 л эфира на 50 г массы. Материал, уложенный рыхло в пакет из фильтровальной бумаги, заливается эфиром в емкости из темного стекла и с притертой пробкой. Емкость заполняется эфиром на 3/4 объема, периодически осторожно взбалтывается. В течении суток растворитель меняется трижды. Обезжиренные пакеты помещают в широкий кристаллизатор и под тягой растворитель испаряют.
Не обезжиривают семена зерновых культур и некоторых зернобобовых с малым содержанием жира.
Навеску 2,5 ± 0,001 г берут в фарфоровую ступку и помещают в морозильную камеру холодильника. Если нет холодной комнаты, фарфоровые ступки помещают в поддон с водой и воду замораживают, выдерживают 12 ч в морозильной камере холодильника.
