Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Лисичкин Г.В. -> "Химия привитых поверхностных соединений " -> 275

Химия привитых поверхностных соединений - Лисичкин Г.В.

Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю. Сердан А.А., Нестеренко П.Н. Химия привитых поверхностных соединений — М.: ФИЗМАТЛИТ, 2003. — 592 c.
ISBN 5-9221-0342-3
Скачать (прямая ссылка): himiyprivitihpoverhnostnihsoedineniy2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 269 270 271 272 273 274 < 275 > 276 277 278 279 280 281 .. 300 >> Следующая

Si-600 4- аминопро-пнльные группы + 4- бромпропилаэросил + «ггептиламин 4,60 1,43 0,05
9.9]
Сорбенты, с иммобилизованными белками
541
Процентное содержание углерода после последовательного модифицирования кремнезема увеличивается, что свидетельствует о прививке новых групп на поверхность носителя.
Привитые на поверхность кремнезема аминогруппы титровали раствором 0,01 М соляной кислоты в растворе хлорида натрия, используя способность аминогрупп присоединять один протон. Вывод о количестве аминогрупп, привитых к кремнезему, сделан из расчета, что на каждую аминогруппу приходится одна молекула кислоты.
На основании проведенных исследований можно заключить, что микрочастицы модифицированного аэросила химически связываются с поверхностью модифицированных частиц кремнезема. Это позволяет получить частицы с различными функциональными группами на внешней и внутренней поверхностях и в дальнейшем видоизменять внутренние и внешние модифицирующие слои в желаемом направлении.
Методом эксклюзионной хроматографии с использованием полистирольных стандартов различной молекулярной массы (от 510 до 3 300 000 дальтон) определен предел эксклюзии на колонках с синтезированными гетероповерхностными сорбентами. Из градуировочного графика зависимости логарифма молекулярной массы от времени удерживания (рис. 9.10) видно, что предел эксклюзии для обоих гетероповерхностных сорбентов (внешняя поверхность алкильная) близок и находится в области 10±0,5 тысяч дальтон. Для сорбентов с диольной защитой внешней поверхности предел эксклюзии определяли по полиэтиленгликольным стандартам в элюенте вода-ацетонитрил (30:70). Предел эксклюзии находился в области 6—10 тысяч дальтон, но не исключено, что он зависит от исследуемого класса веществ и от состава элюента.
9.9. Сорбенты с иммобилизованными белками
Следующий круг сорбентов представляет собой силикагели, модифицированные различными глобулярными белками. Идея защиты сорбента белком состоит в предварительном заполнении наиболее активных сорбционных центров и участков на поверхности сорбента белковыми макромолекулами с их ковалентным закреплением и / или с последующей поперечной внутри- и межмолекулярной «сшивкой». При этом в зависимости от природы белка и от физико-химических свойств сорбента (диаметр пор, природа исходного модифицирующего покрытия и т. д.) иммобилизация происходит преимущественно или исключительно на внешней поверхности. Образующееся в результате внешнее плотное биополимерное покрытие препятствует сорбции белков вводимой пробы на наружной поверхности сорбента и мешает их проникновению в поры. Белки из таких колонок выходят по эксклюзионному механизму раньше «мертвого» времени, определенного для небольших молекул. Таким образом получается сорбент, намеренно «засоренный» белком. В результате,
Рис. 9.10. Градуировочный график хроматографирования полистирольных стандартов па колонках с сорбентами, имеющими в порах: 1) амипное покрытие;
2) диолыюе покрытие
542
Гетероповерхностные сорбенты и их применение
[Гл. 9
как правило, в различной мере снижается эффективность и разрешение, однако это снижение предсказуемо и воспроизводимо, что в сочетании с постоянством давления в хроматографической системе делает эти сорбенты удобными в практическом применении (как и в случае экранирования полиэтиленгликолем).
9.9.1. Основные вопросы, связанные с иммобилизацией белков. При рассмотрении вопросов, связанных с иммобилизацией белков, в первую очередь необходимо отметить, что при иммобилизации белок частично денатурируется, то есть, по наиболее общему определению, изменяет в какой-то степени свои первоначальные (нативные) характеристики. Эти изменения происходят как под воздействием физико-химических условий синтеза (температура, состав и концентрация модифицирующего раствора), так и в результате ковалентной межмолекулярной сшивки. Поэтому условия синтеза гетероповерхностного сорбента, предназначенного для анализа биологических проб с прямым вводом, следует подбирать таким образом, чтобы, с одной стороны, не происходило значительных изменений нативной глобулярной структуры белка для создания максимально однородного внешнего покрытия частиц, а с другой — чтобы уже иммобилизованный белок был лишен детерминантных групп (активных центров) для устранения возможных биоспеци-фических взаимодействий с содержащимися в пробе белками. Хотя для иммобилизации используются преимущественно «инертные» белки (например, сывороточный альбумин), их инертность весьма относительна. Но, по крайней мере, такое допущение принимается по сравнению со специализированными белками. Примерно в половине работ, посвященных созданию селективных электродов и сорбентов при иммобилизации ферментов, последние иммобилизуются совместно с альбуминами или коллагеном, либо на их матрицы.
В то же время уже более тридцати лет известно, что «большинство найденных в природе белков при парентеральном введении в организмы другого вида действуют как антигены» [38, с. 430] и «результаты анализа продуктов гидролиза очищенных антител ... показывают, что по своему аминокислотному составу антитела очень близки (если не идентичны) нормальным сывороточным 7-глобулинам» [38, с. 438]. Измерение соотношения глобулин / альбумин проводится при рутинном анализе крови. Очевидно, что при недостаточном изменении свойств иммобилизованного белка не исключено его взаимодействие по типу антиген - антитело с 7-глобулинами плазмы крови, содержащимися в пробе. В случае анализа слюны в пробе неизбежно присутствуют ферменты, которые также могут сильно удерживаться и отрицательно воздействовать на привитые молекулы альбумина (разрушать их) в случае сохранения доступных участков с нативной структурой.
Предыдущая << 1 .. 269 270 271 272 273 274 < 275 > 276 277 278 279 280 281 .. 300 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed