Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Лисичкин Г.В. -> "Химия привитых поверхностных соединений " -> 222

Химия привитых поверхностных соединений - Лисичкин Г.В.

Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю. Сердан А.А., Нестеренко П.Н. Химия привитых поверхностных соединений — М.: ФИЗМАТЛИТ, 2003. — 592 c.
ISBN 5-9221-0342-3
Скачать (прямая ссылка): himiyprivitihpoverhnostnihsoedineniy2003.djvu
Предыдущая << 1 .. 216 217 218 219 220 221 < 222 > 223 224 225 226 227 228 .. 300 >> Следующая

Для разделения и анализа биополимеров широко используется эксклюзионная хроматография, где основным требованием к сорбентам является полное отсутствие адсорбции разделяемых соединений. Материалы на основе кремнезема индуцируют неспецифические взаимодействия с белками в водной среде из-за природы их поверхности (в основном из-за силанольных групп). Поэтому поверхность кремнезема должна быть модифицирована в целях использования сорбентов на его основе
438
Применение поверхностно-модифицированных материалов
для высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ) белков. Уже обработка кремнезема 7-аминопропилтриэтоксисиланом приводит к значительному снижению адсорбции белков [256], но наибольшее распространение получили сорбенты с привитыми гликолевыми группами, предложенные Ф. Ренье с соавт. [257]. Следует, однако, иметь в виду, что промышленные сорбенты для эксклюзионной хроматографии все же проявляют свойства катионо- и анионообменников, а также заметные гидрофобные взаимодействия. Показано, что такие взаимодействия можно свести к минимуму изменением ионной силы элюента и оптимизацией pH [258]. В ряде случаев эти эффекты могут быть использованы и для повышения селективности разделения. Кремнеземы, модифицированные аминопропильными и эпоксигруппами, являются удобными промежуточными сорбентами, пригодными для последующего модифицирования, еще больше снижающего адсорбцию биополимеров [257, 259-264].
Интересный способ получения сорбента для ВЭЭХ предложен в работе [265], где шарики кремнезема покрывали гидрофильными полимерными гелями (декс-транами различной молекулярной массы), содержащими определенное количество диэтиламиноэтильных групп (ДЕАЕ). Важно, что носители, модифицированные декстраном, минимизируют адсорбцию белков и их фрагментов из водных растворов. Для изменения размера пор в зависимости от температуры на поверхность шариков из декстран-ДЕАЕ-пористого кремнезема наносили изменяющий объем при температурных изменениях поли(1М-изопропилакриламид) (ПИПАА). Структура этих сорбентов до и после модифицирования была исследована методами сканирующей электронной (СЭМ) и сканирующей силовой микроскопии (ССМ). Модифицирование кремнезема слоем декстран-ДЕАЕ и ПИПАА улучшает нейтральность сорбента и минимизирует неспецифические взаимодействия между сорбентом и белками в растворе. При низкой температуре сорбент, модифицированный ПИПАА, проявлял высокую разрешающую способность в ВЭЭХ, что позволило получить лучшее разрешение белков и их фрагментов, но при более высокой температуре за счет гидрофобных взаимодействий ПИПАА с некоторыми белками время их выхода возрастает.
Билирубины могут быть довольно быстро (за 15 мин) разделены, и определено их количественное содержание при прямом вводе плазмы в ISRP-колонку (Internal Surface Reversed Phase — column) [266]. Отчетливые пики Bu были получены при использовании простой подвижной фазы — ацетонитрил : 0,5 М трис-НС1 (20 : 80 объемн., pH = 7,2). Когда образцы сыворотки свиней и лошадей проанализировали с использованием техники прямого ввода, то были получены четыре пика билирубинов, и обнаружилась действительная корреляция между суммой высот пиков билирубина (дц-билирубина, диконъюгированного билирубина, моно-конъюгированного билирубина и неконъюгированного билирубина — приведены в порядке выхода из колонки), наблюдаемых в ВЭЖХ, и общим содержанием билирубинов, измеренных стандартной независимой методикой (подробнее о применении техники прямого ввода см. в гл. 9).
Высокой разрешающей способностью в разделении биополимеров обладают ионообменные сорбенты, среди которых наиболее успешно используются кремнеземы, модифицированные полиэтиленимином, — анионообменники [267] и слабые ка-тионообменники [268]. И хотя полиэтиленимин практически не повышает устойчивости сорбентов в сильнощелочных средах, при умеренных pH такие сорбенты проявляют высокую стабильность. Следует иметь в виду, что при разделении на разных анионообменниках могут наблюдаться различия в форме пиков и удерживании.
8.2] Применение поверхностно-модифицированных материалов в хроматографии 439
Как показало кинетическое исследование [269] явления массопереноса бычьего сывороточного альбумина (БСА) в двух разных анионообменных колонках (Resource-Q и TSK-GEL-DEAE-5PW), концентрационная зависимость общего коэффициента скорости массопереноса показывает, что при хроматографическом разделении в колонках и анионообменниках происходят несколько процессов: продольная дисперсия, массоперенос из жидкости в частицу, диффузия внутри частиц и адсорбционно-десорбционные процессы. В колонке Resource-Q диффузия внутри частиц дает основной вклад в уширение полосы по сравнению с уширениями от других процессов. Коэффициент диффузии по поверхности БСА имеет положительную концентрационную зависимость, которой, по-видимому, можно объяснить линейную зависимость коэффициента скорости массопереноса от концентрации БСА. С другой стороны, в колонке TSK-GEL-DEAE-5PW вклад адсорбции/десорбции имел почти такую же величину, как вклад из-за диффузии внутри частиц. В целом кинетика массопереноса на этих двух анионообменниках имеет некоторые отличия. Авторы делают вывод, что положительная концентрационная зависимость коэффициента диффузии по поверхности может быть объяснена моделью гетерогенной поверхности.
Предыдущая << 1 .. 216 217 218 219 220 221 < 222 > 223 224 225 226 227 228 .. 300 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed