Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
198
Глава VIII
цию в видимой области [18, 19]. Поэтому мы рассмотрим, как проходит разделение на ионообменниках различных типов, тем более что ионному обмену в жидкостной хроматографии при высоком давлении посвящены многие монографии [20 — 24].
U Классические ионообменмики в жидкостной хроматографии при высоком давлении
На рис. VIII.4 показано разделение аминокислот на ионообменной смоле, приемлемой для хроматографии при высоком давлении.
Величина частиц ненабухшей смолы составляет 8—9 мкм. На сравнительно короткой колонке (35 см) за 2 ч удается разделить 16 аминокислот. Для обнаружения используется флурам. При перепаде давления примерно 30 атм скорость элюента составляет 0,5 мл/мии. Подобные смолы со степенью сшивки примерно 8% и небольших размерах частиц в некоторых случаях можно подвергать даже более высоким давлениям. Скотт [20а] выполнил многочисленные разделе-
/4
t, мин
Рис. VIII.4. Анализ аминокислот (Durrum Datenblatt).
Колонка: 35 см х 3,2 мм (внутр.); неподвижная фаза: ионообменник дуррум DC-4 А; элюент: буферная система V по Дурруму; F = 12 мл/ч; Др = 32 атм; реакции определения: флуорескамин — амннко —
флуорнметр.
Проба: / — аспарагиновая кислота; 2 —треонин; 3 — серии; 4 — глутаминовая кислота; 5 — глицин; б —аланин; 7— цистин; 8 — валнн; 9 — метионин; 10 — изолейцин; // —лейцнн; 12 — тирозин; 13 — фенилаланин; 14 — лизин; 15 — гистидин; 16 — аргинин.
Ионообменная хроматография
199
О 20 40 60
t, мин
Рис. VIII.5. Разделение сахаров методом распределительной хроматографии на ионообменниках (Siemens Datenblatt 05/05).
Колонка: 50 см х 3 мм (внутр.); неподвижная фаза: ионообменник амннекс А-7 в литиевой форме; элюент: 0,001 м раствор LiCl в водио-этанольной смеси (15:85); F т 0,45 мл/мин; Др = 270 атм;
Т= 70°С.
Проба: 1 — рамноза; 2 — глюкоза; 3 — сахароза; 4 — трегалоза; 5 — мелнбноза; б — рафиноза.
ния для определения органических компонентов в биологических жидкостях, растворах, например моче, сыворотке и т. д., на классических органических ионообменниках. В некоторых отдельных пробах мочи удалось определить от 100 до 120 веществ, поглощающих в УФ-области; при использовании специфических реакций с углеводами идентифицировано 48 компонентов [26, 26а]. Полный анализ мочи длится от 20 до 30 ч [27]. Разработаны автоматические приборы для клинических лабораторий [27а]. В работе [28] описано разделение сахаров в виде боратных комплексов, проведенное методом жидкостной хроматографии при высоком давлении, а в работе [29] разделение их методом распределительной хроматографии [29]. Пример разделения показан на рис. VIII.5 [30]. Методом хроматографии при высоком давлении на органических ионообменниках разделены также кето- и оксикарбоновые кислоты [31]. С помощью аминокислотного анализатора на ионообменнике были идентифицированы ароматические соединения [32].
200
Глава VIII
2. Поверхностно-пористые материалы
После опубликования основополагающей работы Хорвата и Лип-ски [33] иа поверхностно-пористых материалах с нанесенным катио-но- и анионообменным слоем начали проводить разделение нуклеиновых кисло- и оснований [21—24, 34, 35]. Продолжительность анализа составляет примерно 30 мин. На силикагеле, покрытом пленкой полимера, например зипаксе, разделены нуклеиновые кислоты, компоненты фармацевтических препаратов и т. д. [21, 36 — 39]. Оказалось, что ионообменники пригодны для определения и разделения составных частей лекарственного растительного сырья (морфин, героин, метадон) [13]. Изготовлены также ионообменники, у которых органические радикалы, содержащие ионообменные функциональные группы, «привиты» к поверхностному слою силикагеля частиц ППМ (образуют с ним ковалетные связи). Разделение нуклеиновых кислот на привитом ионообменнике пермафазе Дюпон показано на рис. VIII.6. Такие ионообменники с успехом используют в анализе нуклеотидов [40].
Ионообменники типа «щеток» сочетают хорошие хроматографические свойства с высокой обменной емкостью [8, 9, 12, 41]. На подобных ионообменниках проведены анализы аминокислот [8] и ну-
3. Ионообменники на основе химически модифицированного силикагеля
2
6
Рис. VIII.6. Разделение моно-, ди- и трифосфатов методом градиентного элюирования (бюллетень методов ЖХ фирмы Дюпон 820 М 11).
Колонка: 100 см х 2 мм (внутр.); ионообмеииик пермофаза А АХ; элюент: экспоненциальный гради ент от 0,002 м КН2РО* (pH 3,3) до 0,5 м КН2РО*
скорость подъема 3%/мин; F = 1 мл/мии; Ар * 70 атм
—w vw vv j — CL»r , О — и иг , / — rtL/r , О — UL/r ,
t, MUH 10 - UTP; И - АТР; 12 - GTP.
Ионообменная хроматография
201
1 1
t, мин t. мин
Рис. VIII.7. Разделение витаминов на ионообменниках [12].
Колонка: 50 см х 2,3 мм (внутр.); ионообменник: бутнлсульфокнслота на меркогеле Si 100, if, «10 мкм, 230 мкэкв./г; элюеит: 0,02 м буфер фосфата натрия. Слева: pH 5,5; и = 2,2 см/с; Ар - 90 атм; проба: 1 — тиамнн 2НС1; 2 — амид никотиновой кислоты; 3 — пнридоксол НС1. Справа: pH 3,9; и = 3,6 см/с; Д, = 150 атм; проба: 1 — аскорбиновая кислота; 2 - никотиновая кнлота; 3-амид никотиновой кислоты; 4 - пиридоксол НС1.
