Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
в) Разделяющая жидкость может выноситься из колонок в результате механической эрозии.
г) Вещества пробы всегда следует растворять в элюенте, пропущенном через разделительную колонку, а не в чистом ненасыщенном растворе, так как иначе вымывается неподвижная фаза.
Если вое перечисленные факторы не учитываются, продолжительность работы разделительной колонки снижается. Уменьшение количества разделяющей жидкости в разделительной колонке всегда заметно сказывается на уменьшении времен удерживания в тех случаях, когда колонка заполнена инертными носителями. Если носитель активный, время удерживания может как уменьшаться, так и увеличиваться (рис. VII. 1). У разделительных колонок с большой степенью покрытия (больше 0,3 г разделяющей жидкости на 1 г носителя) небольшие изменения количества разделяющей жидкости ведут к менее заметным изменениям времени удерживания.
Распределительная хроматография
179
2. Предельная допускаемая нагрузка (линейная емкость)
Предельная допускаемая нагрузка разделительных колонок (линейная емкость) в распределительной хроматографии примерно на порядок выше, чем в чисто адсорбционных системах (см. гл. VI, разд. I.A). Без заметного увеличения размывания полос можно ввести в колонку 10” 3 — 10” 2 г пробы на 1 г разделяющей жидкости. Размывание полосы возрастает значительно быстрее, чем уменьшаются значения к' при перегрузке колонки. На рис. VII. 4 приведены кривые, полученные для носителей с различным максимальным количеств см нанесенной неподвижной фазы. Если мерой допускаемой нагрузки служит увеличение размывания полосы, то предельная допускаемая нагрузка не зависит от значения к'. Перегрузка колонки (возрастание размывания полосы) не всегда ведет к образованию хвостов. Если в качестве границы допускаемой нагрузки используют изменение значений к', то получают несколько более высокие значения. Несмотря на такие высокие допускаемые нагрузки, системы в жидкостной хроматографии высокого давления часто перегружены, прежде всего в тех случаях, когда общее количество разделяющей жидкости мало, например когда колонка заполнена ППМ.
Рис. VII.4. Допускаемая нагрузка в системах распределительной хроматографии (колонка с максимальной степенью покрытия) [9].
Колонка: 50 см х 2 мм (внутр.); неподвижная фаза: 1) 0,91 г ОДПН/1 г порасила А; 2) 0,79 г/1 г по-расила С; 3) 0,34 г/1г порасила Е; элюент: «-гептан; и= 1,97 см/с; Г=34°С.
Проба: беяэонитрил.
12*
180
Глава VII
3. Препаративное применение
Распределительная хроматография допускает большие нагрузки, и поэтому она пригодна для препаративных разделений. В разделительную колонку с внутренним диаметром 2 мм длиной 50 см, заполненную силикагелем с максимальной степенью покрытия, можно без опасения вводить до 10 мг вещества в расчете на компонент. Этого достаточно для многих аналитических исследований и реакций. Если разделение хорошее, в колонку можно ввести еще большую пробу. Однако выделенные составные части пробы после удаления элюента загрязнены разделяющей жидкостью, поэтому для препаративных работ разделяющую жидкость следует выбирать таким образом, чтобы ее можно было легко отделить.
4. Разделяющая способность
Разделяющая способность колонок для распределительной хроматографии зависит от размера частиц носителя. Кроме того, на размывание полосы влияет вязкорть разделяющей жидкости [11]. Для колонок с максимальной степенью покрытия наблюдается предсказанная теорией зависимость числа теоретических тарелок п (член Q от к' [26]. Максимальное значение h достигается при к' « 1. Если к1 выше 30, значения h сравнимы с соответствующими пику инертного вещества [8, 9]. Удивительно, что при использовании частиц малого диаметра (dp < 10 мкм) эта зависимость больше не наблюдается. В этом случае h — постоянная величина, на которую почти не влияет к' пробы [22]. В подобных разделительных колонках с увеличением скорости потока h возрастает незначительно.
5. Техника программирования
Из используемых в адсорбционной хроматографии методов программирования, позволяющих сократить длительность анализа, для распределительной хроматографии приемлемы только программирование давления и скорости потока. На рис. VII. 5 показана хроматограмма, полученная при программировании давления. Разделение, выполненное при низкой начальной скорости 0,9 см/с, заняло бы более 60 мин.
Программирование температуры и градиентное элюирование в распределительной хроматографии применять нельзя, так как при этом меняется состав системы носитель — разделяющая жидкость (ср. программирование с «замедлителем» в гл. VI, разд. III.2) и даже разделяющая жидкость может быть полностью вымыта из колонки. Для любой разделяющей жидкости, используемой в качестве непо-
0 1 2 3 4 5 6 7
t, мин
Рис. VII.5. Распределительная хроматография с программированием давления [9].
Колонка: 50 см х 2 мм (внутр.); неподвижная фаза: 0,72 г ОДПН/1 г порасила С с привитым оксипро-пионитрнлом, dp& 40 мкм; элюент: н-гептаи; Др: от 7,5 до 135 атм; Т — 34°С.
Проба: 1 - нонан (к' »0); 2 - тионафтен (0,3); 3 - Н^-днметиланилнн (0,8); 4 - а-нафтохинолнн (1,6);
