Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Область линейности почти у всех детекторов составляет 1:1000 и, по-видимому, достаточна для количественного анализа.
Область линейности сигнала УФ-детектора увеличивается с увеличением степени монохроматичности источника УФ-излучения.
Показания почти всех описанных здесь детекторов пропорциональны концентрации, и величина сигнала не зависит от скорости потока. Только показания микроадсорбционного детектора связаны с величиной потока. В этом случае сигнал тем больше, чем выше скорость потока. Показания пламенно-ионизационного детектора, применяемого в газовой хроматографии, также зависят от скорости потока. Однако так как в системе с жидкостным хроматографом предусмотрена транспортная система, вводящая в пламенно-ионизационный детектор определенное, зависящее от его концентрации в элюенте колонки количества вещества, то этот детектор также можно считать концентрационным.
Чувствительность применяемых в настоящее время детекторов недостаточна для прямого определения многих важных соединений, например аминокислот, в натуральных смесях. Поэтому приходится проводить химическое модифицирование и получать производные, которые можно определять с помощью более чувствительного детектора. Так, алифатические аминокислоты определяют с помощью рефрактометра, однако результаты анализа будут намного точнее, если те же самые аминокислоты определяют в виде их денсилпроиз-водных, используя УФ-детектор или детектор по флуоресценции [27, 37]. Безусловно, для этой цели пригодны не только денсилпро-изводные, описан, например, анализ фенолизоцианатов [38] или ани-лидов [39] жирных кислот, нитробензоатов сахаров или спиртов [40] ИТ. д
Чувствительность определения можно усилить, если проводить химическую реакцию в тот момент, когда соединение вышло из разделительной колонки, но еще не попало в детектор. Однако при этом достигнутое в колонке разделение зон веществ не должно ухудщать-ся в результате реакции, реагирующее вещество и элюент должны хорошо смешиваться. Реакцию проводят в потоке (во время реакции элюент и реагент должны находиться в одном объеме), и смесь попадает в фотометрический детектор только после того, как реакция закончится.
Делить поток элюента на сегменты с помощью пузырьков воздуха в жидкостной хроматографии при высоких давлениях можно, только если разделительная способность достаточно высока, иначе произойдет сильное размывание полосы. Подавляя шумы от пузырьков воздуха в детекторе с помощью электронного устройства, можно все же получить и в этом случае сглаженную хроматограмму [48]. Несмотря на отмеченные трудности, такие системы все же пригодны
80
Глава IV
для специфического определения ряда соединений. Так, органические фосфаты определяют с высокой селективностью с помощью холинэстеразного метода. Хотя стоимость такого рода реагентов достаточно высока, быстро протекающие реакции получили широкое распррстранение. Например, определение аминокислот или аминов проводят с помощью флурама, который быстро дает очень коротко-живущую флуоресценцию в видимой области.
Классическую реакцию с нингидрином можно проводить в трубках подходящей формы, дополнительного размывания полосы при этом не происходит [42]. Разрешающая способность при разделении кислот на колонках, заполненных частицами диаметром 10 мкм, составляет 0,1 — 1 нг. Используя общеприменимый принцип проведения реакций в трубках специальной формы [43], можно проводить и другие реакции [42].
В работах [44, 45] описана реакция обмена элюента с ионом Се (IV), в результате которой образуются флуоресцирующие ионы Се (III).
В качестве реакторов для проведения реакций обмена после хроматографического разделения пригодны заполненные разделительные колонки, но перепад давления в общей системе (разделительная и реакционная колонки) при этом больше, чем в том случае, когда реакцию проводят не в колонке, а в специальной трубке.
Авторы работ [46, 49] исследовали реакции, сопровождающиеся образованием флуоресцирующих или окрашенных соединений в реакционной колонке. Описаны также реакционные детекторы [47] для определения сахаров в элюате из ионообменных колонок (боратные комплексы).
Практическое применение таких реакционных детекторов настолько сложно, что для каждой отдельной реакции необходимо изготовить и оптимизировать свой собственный детектор. По-видимому, в ближайшее время выпуск их едва ли будет налажен. Скорее всего можно ожидать появления комплектных систем для решения специальных проблем разделения (например, определения сахаров, аминокислот).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Обзор:
Бирн С. в кн. Современное состояние жидкостной хроматографии,—М.:
Мир, 1974, 325 с.
1. Felton Я., J. Chromatogr. Sci., 7, 13 (1969).
2. Williams D. H., Fleming /., Spektroskopische Methoden in der organischen
Chemie. Stuttgart, Thieme-Verlag, 1968.
3. Deininger G., Halasz /., J. Chromatogr. Sci., 8, 499 (1970).
4. Bombaugh К Levangie R. F., King R. N., Abrahams L., J. Chromatogr.
Sci., 8, 657 (1970).
5. Handbook of Chemistry and Physics. 46th Edition. Chemical Rubber Co.
1965.
