Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Д. Детектор по флуоресценции
С помощью детектора по флуоресценции в элюенте можно обнаружить вещества, у которых при облучении главным образом в ближней УФ-области возбуждается флуоресценция, и они излучают
Детекторы
73
в видимой области. Длина волны возбуждающего излучения либо задается типом лампы (например, ртутной лампы среднего или высокого давления), либо регулируется монохроматором. В большинстве случаев измерение проводят перпендикулярно направлению возбуждающего излучения. Рассеянный свет возбуждающей длины волны можно замаскировать с помощью подходящего фильтра.
Детектор по флуоресценции очень специфичен, правила работы с ним еще сложнее, чем правила работы с УФ-детектором. Так, например, флуоресценцию можно погасить или подавить невидимыми сопутствующими веществами. Некоторые растворители, в частности кислородсодержащие, гасят флуоресценцию, и поэтому их, как и элюенты, поглощающие в области возбужденного излучения, использовать нельзя.
Чувствительность детекторов по флуоресценции часто выше, чем чувствительность УФ-детекторов. Так, наиболее часто применяемый в качестве стандарта при флуоресцентных измерениях хининсульфат удается определять даже в том случае, когда концентрация его составляет 10“ 7%. Область линейности сигнала у детектора по флуоресценции больше, чем у УФ-детекторов.
Если подлежащие разделению соединения не обладают флуоресценцией, то их, как правило, можно перевести во флуоресцирующие производные и тем самым значительно повысить возможность их обнаружения. Так, например, аминокислоты, алкалоиды, катехинамины можно определить с помощью детектора по флуоресценции в области нанограммовых количеств в виде денсилпроизводных (1-димети-ламинонафталин-8-сульфоновая кислота) [27, 28, 29]. Разделить ден-сил-производные относительно просто, хотя молекулярные свойства в результате превращения в производные становятся очень близкими (ср. рис. VII.9 и VII. 10).
Е. Другие детекторы
1. Электрохимические детекторы
В ряде работ [9, 10, 23, 30, 31, 52 — 58] описано детектирование пробы в элюате с помощью электрохимического окисления или восстановления (полярографический и амперометрический методы). В этом случае обычно поддерживая постоянное напряжение, определяют как функцию времени ток, протекающий между электродами при окислении или восстановлении пробы. На практике осуществить метод окисления проще, так как элюент при этом не нужно обрабатывать предварительно (удаление растворенного кислорода). Если же используется метод восстановления, то из элюента следует удалить растворенный кислород. Окисление или восстановление и вместе с тем возможность определения веществ зависит от окислительного или восстановительного потенциала элюента. Само собой
74
Глава IV
разумеется, что элюент должен обладать известной проводимостью. В водные элюенты для этого добавляют нитрат калия (0,05 м), в органические элюенты рекомендуется добавлять перхлорат тетраэтил-аммония. Если анализируются водные и водно-спиртовые растворы, можно работать с потенциалом 1 В (относительно стандартного каломельного электрода). При этом напряжении можно, кроме того, определять органические азотсодержащие соединения (например, ' амины, аминокислоты, гетероциклические азотсодержащие соединения и т. д.), нитросоединения, фенолы, альдегиды и кетоны. Поскольку для каждого класса соединений характерно свое напряжение разложения, то можно, меняя напряжение, сделать детектор или очень селективным для определенного класса соединений, или, если напряжение выбрано высоким, пригодным для всех классов соединений.
Наряду с классическим капельным ртутным электродом [9] используют также специальные электроды, например электрод на основе углеродсодержащей силиконовой резины [10] или чистые углеродные электроды [30]. Твердые электроды следует очищать от продуктов окисления. С этой целью, в частности, ведут работу в пульсирующем режиме: положительное рабочее напряжение на короткое время меняют на отрицательное очищающее (восстанавливающее) напряжение. Впрыскивание элюента на электрод [30] улучшает очистку.
Чувствительность детекторов данного типа сильно зависит от окислительной или восстановительной способности веществ пробы. На основе имеющихся в настоящее время данных можно считать детекторы данного типа очень перспективными, так как такие важные вещества, как, например, адреналин и его производные, можно определить в биологически важной области концентраций.
2. Детектор по электропроводности
Детектор по электропроводности является очень специфичным, так как дает сигнал только от ионов, и применять его можно только для водных и полярных элюентов. Выпускаемые приборы позволяют определять как абсолютную, так и дифференциальную (относительно элюента) проводимость. Точность при дифференциальном методе больше, чем при определении абсолютной проводимости. Для того чтобы можно было проводить с достаточной чувствительностью измерения в элюентах с большой проводимостью, приборы оборудуют устройством для компенсации нулевого значения. Само измерение проводимости ставит некоторые проблемы.
