Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Метод сбалансированной плотности детально описан в ряде работ [14—17, 22], там же приведены конструкции устройств для заполнения [14, 17]. Силикагель с истинной плотностью примерно 2Д можно суспендировать только в бром- или иодсодержащих углеводородах. Как правило, для этой цели используют теграбромэтан. Для снижения плотности до требуемого значения добавляют четыреххлористый углерод. Для того чтобы избежать комкования частиц, желательно добавить к суспендирующей жидкости примерно 10% полярного соединения (диоксан, метанол). На рис. III.4 показана возможная конструкция сосуда для заполнения. Общий объем сосуда должен быть равен примерно 100—150 мл, чтобы можно было заполнять микропрепаративные колонки, объем которых довольно велик.
Чтобы можно было заполнить колонку длиной 30 см с внутренним диаметром 4 мм, необходимо суспендировать ~ 2 г силикагеля в 50 мл суспендирующей жидкости (например, смеси тегра-бромэтана, диоксана и четыреххлористого углерода 20:15:15). Эту суспензию осторожно переводят в сосуд для заполнения (см. рис.
III.4). Разделительную колонку с помощью переходника, диаметр которого равен диаметру колонки, а длина составляет примерно 2 см, присоединяют к сосуду для заполнения и заполняют элюентом. Переходник заполняют насадкой вместе с колонкой, но не используют при разделении. Поверх суспензии заливают более легкий смешиваемый с теграбромэтаном элюент, например н-гептан. После
4 Заказ 825
50
Глава III
Рис. III.4. Схема устройства для заполнения колонки.
Объем: ~ 100 мл для аналитических голоног 30 см х 4 мм (внутр.) и - 200 мл для голоног 30 см х 10 мм (внутр.). Диаметр выходного отверстия трубки сосуда для заполнения должен быть равен диаметру заполняемой колонки и внутреннему диаметру переходника.
присоединения источника давления включают насос; при этом в си-стеме ни в коем случае не должны образовываться пузырьки воздуха. С помощью насоса суспензию затем передавливают в колонку. Давление, при котором происходит заполнение колонки, должно быть больше наивысшего рабочего давления, при котором проводится анализ. Об окончании заполнения в приведенном примере (вытеснение тетрабромэтана гептаном) свидетельствует падение давления (меньшая вязкость гептана!). Чтобы полностью удалить суспендирующую жидкость и уплотнить насадку, колонку промывают еще некоторое время при высоком давлении. В качестве вытесняющих жидкостей предпочтительны органические элюенты, так как в этом случае на колонке можно работать сразу после заполнения и не нужно проводить дальнейшее кондиционирование (например, сложное удаление воды).
Тетрабромэтан очень легко отщепляет бром или бромистый водород, которые при промывании колонки гептаном, водой, метано-
Аппаратура для жидкостной хроматографии
51
лом и т. д. удаляются не полностью. Химически модифицированные фазы под действием тетрабромэтана могут разлагаться или изменяться. В таких случаях целесообразно заполнять колонки вязкостным методом. В качестве суспендирующего материала используют жидкости с высокой вязкостью (например, парафиновое масло, циклогексанол и т. д.). Аппаратура и методика заполнения идентичны описанным выше.
Описаны также такие методы заполнения, в которых испйльзуются оба принципа (сбалансированная плотность и высокая вязкость). Если регулировать плотность и (или) вязкость суспендирующей среды так, чтобы суспензия оставалась стабильной по крайней мере до тех пор, пока не закончится заполнение колонки, то с помощью суспензионного метода заполнения можно заполнить колонку практически любой насадкой.
Для окиси алюминия пригодна смесь тетрабромэтан - диоксан (90:10 по объему). Наполнение колонок для ситовой хроматографии и ионного обмена неподвижными фазами на основе полистирола и т. д. можно проводить с той средой, в которой эти фазы предварительно набухали и в которой будет проводиться разделение. Следует помнить, что при смене элюента степень набухания и соответственно заполнения меняется. Этот метод заполнения колонки непригоден для носителей, предварительно покрытых разделяющей жидкостью (носители, применяемые в распределительной хроматографии), так как она в процессе заполнения или кондиционирования может быть вымыта. Таким способом можно заполнять колонки только чистыми носителями, а разделяющую жидкость наносят уже в заполненной колонке по методу нанесения разделяющей жидкости из элюента (см. гл. VII,).
Приготовить хорошо упакованную колонку может только опытный экспериментатор. Проще заполнять колонку частицами диаметром примерно 10 мкм, поэтому новичку следует начинать работать именно с такой насадкой. Предположим, что ему удастся получить хорошо и воспроизводимо упакованные колонки длиной 30 см с 3000 теоретических тарелок и что такая разделительная способность для решения поставленных перед ним задач еще недостаточна, тогда он должен попытаться заполнить колонку частицами диаметром примерно 5 мкм. Для рутинных анализов такие насадки используются редко, так как применяемая при этом аппаратура должна отвечать определенным требованиям.
