Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
Аппаратура для жидкостной хроматографии
45
каждой замене прсцсладки из начала разделительной колонки следует тщательно удалить все попавшие туда крошки прокладки. Целесообразно помещать в начало колонки небольшой тампон из стеклянной ваты: он будет играть роль фильтра и позволит легко удалить остатки прокладки. Такой тампон из стеклянной ваты, кроме того, не дает частицам насадки попасть в канюлю шприца, и шприц не засоряется даже в тех случаях, когда пробу вводят непосредственно в разделительную колонку.
Буна-iV и неопрен пригодны в качестве прокладок, если растворителями служат вода, спирты и н-гексан. Если элюирование проводится ароматическими соединениями, прокладки изготавливают из более устойчивого материала — витона-А. Однако при использовании в качестве элюента хлороформа и хлористого метилена время жизни прокладки из витона-А все же очень ограничено; в этом случае более надежна прокладка из белой силиконовой резины.
Очень удобно вводить пробу шприцем с длинной канюлей с боковыми выходными отверстиями [9]. Канюлю вводят поперек потока элюента и закрепляют с помощью двух тефлоновых уплотнений таким образом, что выходное отверстие при заполнении шприца находится вне системы для ввода пробы. Если необходимо ввести пробу, то шприц перемещают настолько, чтобы отверстие на канюле попало в поток элюента непосредственно перед разделительной колонкой. После того как проба введена, канюлю сразу же перемещают в исходное положение, чтобы уменьшить возмущение, возникающее в результате вымывания вещества пробы из канюли.
В другой системе пробу с помощью шприца при нормальном давлении вводят в накопительную петлю непосредственно перед разделительной колонкой. Далее, переключая мембранный вентиль, направляют поток элюента через накопительную петлю и вымывают пробу в разделительную колонку. Благодаря конструктивным особенностям дополнительное размывание полосы при этом методе ввода пробы даже для разделительных колонок, заполненных частицами диаметром около 10 мкм, пренебрежимо мало.
Если разделение проводится при очень высоких давлениях, пробу можно вводить в разделительную колонку при остановленном потоке элюента, т. е. когда в колонке нет давления. При этом почти не наблюдается размывания зоны. После ввода пробы поток элюента восстанавливается, устанавливается рабочее давление и начинается разделение. Конечно, проходит определенное время, прежде чем в колонке опять установится желаемый профиль давления. Такой способ введения пробы не отвечает условию, согласно которому при вводе пробы давление и скорость потока в системе не должны нарушаться. Определение времени удерживания разделяемых веществ при таком способе ввода пробы некорректно. Поэтому в таких случаях вместе с пробой вводят внутренний стандарт и определяют относительное удерживание. При количественных определениях вну-
46
Глава III
тренний стандарт даже необходим. Кроме того, при рассматриваемом способе ввода пробы возможны толчки давления, и в результате плотность насадки разделительной колонки может измениться.
Объем вводимой пробы определяется растворимостью пробы в подходящем элюенте. Однако он не должен быть слишком большим, так как в противном случае становится возможным дополнительное размывание полосы. Опасность размывания существует прежде всего тогда, когда объем пробы и объем подвижной фазы в разделительной колонке — величины одного порядка [19]. При аналитических работах следует брать как можно меньшие объемы проб, т. е. пробы должны быть возможно более концентрированными. В то же время применение сильно концентрированных растворов в препаративных работах может привести к перегрузке начальной части колонки.
Д. Разделительная колонка
1. Материал колонки
В качестве колонок используют чаще всего трубки из нержавеющей стали, а также стеклянные и танталовые трубки. Основное преимущество стеклянных колонок — возможность визуального контроля за качеством заполнения. Однако в тех случаях, когда рабочее давление превышает 70 атм, обычно такие колонки использовать нельзя. Правда, если стеклянную колонку поместить в стальную рубашку и поднять давление в рубашке, то на такой колонке можно работать при давлениях выше 70 атм. Стеклянные трубки имеют гладкую внутреннюю поверхность.
У разделительных колонок из тантала внутренняя поверхность также гладкая [9]. Тантал - очень твердый материал, и резьбовые соединения на таких колонках следует приклеивать. У трубок из нержавеющей стали внутренняя поверхность более или менее шероховата и покрыта продольными канавками. Если эту шероховатость удалить путем расточки трубки или путем полировки ее внутренней поверхности, то такие колонки можно воспроизводимо заполнять насадкой. При этом воспроизводимость заполнения не зависит от способа изготовления исходной трубки (горячее или холодное протягивание, прецизионное протягивание и т. д.). Разделительная способность колонок из нержавеющей стали, обработанных таким образом, может быть примерно в 10 раз выше, чем колонок из необработанных трубок. Воспроизводимость заполнения колонки возрастает от 30 до почти 90% [12].
