Органические реакции, Сборник 12 - Адамс Р.
Скачать (прямая ссылка):
а-Ациламиноацилалкилкарбонат
209
Выделение продукта реакции. Промежуточный продукт для синтеза пептида выделяют различными способами. Если в реакционной смеси имеется твердое вещество, то его можно отфильтровать и испытать на растворимость в воде. В большинстве случаев такое твердое вещество представляет собой хлоргид-рат третичного амина, применявшегося для нейтрализации ацил-аминокислоты, и он полностью растворяется в воде, В некоторых случаях часть продукта реакции выделяют непосредственно из реакционной смеси, и для того, чтобы освободиться от солей амина, его можно промыть водой.
Если применявшийся растворитель не смешивается с водой и продукт реакции имеет нейтральный характер, реакционную смесь можно промыть (предварительно профильтровав) разбавленной соляной кислотой, чтобы освободиться от непрореа-гировавшего эфира аминокислоты, а затем водным раствором соли' и водным раствором бикарбоната натрия для удаления оставшейся ациламинокислоты. При синтезе перкарбобензил-окси-Ь-аргинина вместо водного раствора бикарбоната натрия применяли триэтиламин [94]. Применение соленой воды обычно рекомендуется, чтобы избежать образования эмульсии. Раствор, оставшийся после экстрагирования, высушивают, фильтруют и упаривают в вакууме. Нейтральные эфиры лучше всего получать в кристаллическом виде путем растворения их в этилаце-тате с- последующим прибавлением петролейного эфира. Если этиладетат не вызывает кристаллизации, то ее можно осуществить путем растирания с эфиром или нитрометаном. Если продукт реакции остается в виде сиропообразной жидкости, то обычно он бывает достаточно чистым для применения в следующей стадии (например, в омылении, гидрировании, деацилиро-вании).
Если растворитель, применявшийся в реакции, смешивается с водой, то его можно удалить выпариванием в вакууме и остаток растворить в смеси этилацетата и воды. Иногда для растворения продукта реакции лучше применять хлороформ, чем этил-ацетат.
Если продукт-^пептид со свободной кислотной функцией, то он может оказаться в виде натриевой соли в водном растворе бикарбоната натрия, который можно экстрагировать этиловым эфиром и затем подкислить соляной кислотой, чтобы осадить продукт реакции.
Если реакция не прошла с выходом, близким к количественному, то вместе с продуктом реакции будет выпадать в осадок и исходная а-ациламинокислота. Иногда для очистки целесообразно применять перекристаллизацию, в других случаях перекристаллизация не дает положительных результатов. Это сле-
14 Зак. 1021
210
IV. Синтез пептидов с помощью смешанных ангидридов
дует определять экспериментально. Если карбобензилоксигли-цил-ОЬ-аминокислоту очистить легко, то из этого не следует, что карбобензилоксиглицил-Ь-аминокислота также легко поддается очистке. Могут оказаться необходимыми противоточное распределение или фракционное экстрагирование. Для перекристаллизации ациламинопептидов обычно применяют или водный этиловый спирт, или смесь этилацётата и петролейного эфира.
ПРЕПАРАТИВНЫЕ СИНТЕЗЫ
Этиловый эфир карбобензилокси-Б-бензил-Ь-цистеинил-З-беНт зил-Ь-цистеина [170]. Раствор 346 г карбобензилокси-Б-бензил-L-цистеина в 139 мл триэтиламина в 3 л толуола охлаждают до —5° и обрабатывают 131 мл изобутилового эфира хлоругольной кислоты. Через 10 мин прибавляют холодный раствор 276 г хлоргидрата этилового эфира S-бензил-Ь-цистеина и 139 мл триэтиламина в 2 л хлороформа и смесь оставляют на ночь при 25°. После этого прибавляют еще 1 л хлороформа и смесь промывают последовательно водой, водным раствором бикарбоната, вновь водой и, наконец высушивают безводным сернокислым натрием. Фильтрат выпаривают в вакууме до небольшого объема и перемешивают с петролейным эфиром. Выпавший в осадок этиловый эфир карбобензилокси-Б-бензил-Ь-цистеинил-Б-бензил-Ь-цистеина отфильтровывают и перекристаллизовы-вают из этилового спирта. Выход 382 г (67%), т. пл. 105° (исправлено).
Карбобензилокси-Ь-глутаминил-Ь-аспарагинил-в-бензил-Ь-цистеин [84]. К раствору 4,0 г карбобензилокси-Ь-глутамина в 60 мл тетрагидрофурана и 60 мл диоксана при —5° прибавляют 2,0 мл триэтиламина и 1,35 мл этилового эфира хлоругольной кислоты. Раствор аспарагинил-Б-бензил-Ь-цистеина (приготовленный из 5,9 г N-карбобензилоксипроизводного) в 20 мл воды и 2 н. раствор едкого натра (количество, достаточное, чтобы довести pH до 7,5) прибавляют к раствору ангидрида. Реакционную смесь в течение 3 час перемешивают, поддерживая pH при 7,5 и прибавляя по мере необходимости 4 н. едкий натр. Затем прибавляют 350 мл эфира, отфильтровывают выпавший осадок, сушат его на воздухе, растворяют в 70 мл воды и pH раствора доводят до 2, прибавляя соляную кислоту. Вновь отфильтровывают осадок, высушивают его на воздухе, перемешивают 1 час при 20° с этилацетатом, отфильтровывают и получают 4,8 г (64%) карбобензилокси-Ь-глутаминил-Ь-аспа-рагинил-Б-бензил-Ь-цистеина, т. пл. 90°.
Ангидриды а-ациламинокислоты и карбоновой кислоты 211
Бензиловый эфир карбобензилокси-Ь-лейцил-Ь-аланил-Ь-ва-лил-Ь-фенилаланилглицил-Ь-пролина [124]. Раствор 1,30 г (2мил-лимоля) карбобензилокси-Ь-лейцил'Ь-аланил-Ь-валил-Ь-фенил-аланилглицина и 0,40 г (4 миллимоля) триэтиламина в 25 мл диметилформамида охлаждают до —5° и при перемешивании прибавляют 0,31 г (10%-ный избыток) изобутилового эфира хлоругольной кислоты. Выдерживают 10 мин при той же температуре, прибавляют раствор 0,48 г (2 миллимоля) хлоргидрата бензилового эфира L-пролина в 20 мл диметилформамида и смесь быстро нагревают примерно до 70°, после чего сразу же охлаждают. При добавлении избытка воды продукт реакции выпадает в осадок в виде бесцветного твердого вещества. После двухкратной перекристаллизации каждый раз из 40 мл 50%-ной уксусной кислоты получают 1,00 г (60%) препарата в виде бесцветных микрокристаллических призм, т. пл. 210—212\ [a]u+53,5+0,3° (с=2,1%, ледяная уксусная кислота).
