Биотехнология. Том 17 - Янулайтис А.А.
Скачать (прямая ссылка):
1. Активности рестриктазы Один многофункциональ Отдельные ферменты Один бифункциональный
и метилазы ный фермент (эндонуклеаза и метилаза) фермент, обладающий
рестриктазной и метилазной
активностями
2. Структура белка 3 различные субъединицы Простая (одна или не 2 различные субъединицы
3. Кофакторы, необходимые Адо-мет, АТФ, Mg2+ АТФ, Mg2+, (Адо-мет)*
для рестрикции
4. Кофакторы, необходимые Адо-мет, (АТФ, Mg2+)* Адо-мет Адо-мет, (АТФ, Mg2+) *
для метилирования
5. Соотношение реакций Взаимоисключающие Отдельные активности Возможно одновременное
расщепления и метилиро проявление рестриктазной
вания и метилазиой активностей
6. Узнаваемая последова Прерывистая нуклеотид Короткие последователь Нуклеотидная последова
тельность нуклеотидов ная последовательность; ности, состоящие из 4--- тельность либо вообще не
ие имеет вращательной 8 нуклеотидов, в основном имеет вращательной симметрии
симметрии второго порядка с вращательной симметрией второго порядка, либо имеет
второго порядка некоторые ее элементы
7. Место расщепления Предлоложительно слу В основном внутри узна 24---26 нуклеотидный пар
чайное, по меньшей мере ваемой последовательности в стороне от узнаваемой
1000 нуклеотидных пар в нуклеотидов последовательности нуклеоти
сторону от узнаваемой дов
последовательности нуклео
тидов
8. Место метилирования Узнаваемая последова Узнаваемая последова Узнаваемая последователь
тельность нуклеотидов тельность нуклеотидов ность нуклеотидов
9. Энзиматическая оборачи Нет Да Да
ваемость рестриктазной
реакции
10. Транслокация ДНК Да Нет Нет
перед расщеплением
*—не является абсолютно необходимым, стимулирует энзиматическую реакцию.
Есо57 I и Gsu I по своей структурной организации и (или) энзиматическим свойствам не могут быть отнесены ни к одному из известных трех типов ферментов рестрикции модификации. Оба фермента узнают гексануклеотидные последовательности с некоторыми элементами вращательной симметрии второго порядка: Gsu I—5'CTGGAG и Есо57 I—5'CTGAAG. Обсуждаемой симметрией обладает последовательность 5'СТ—AG, характерная для участков, узнаваемых обоими ферментами. Gsu I и Есо57 I расщепляют ДНК за пределами узнаваемых гексануклеотидов сходным образом через 14 и 16 нуклеотидов в разных цепях ДНК. По этим признакам рассматриваемые ферменты не являются уникальными среди других рестриктаз. Их отличия от остальных рестриктаз были обнаружены в ходе исследования кофакторных потребностей и структурной организации белков. Оказалось, что наряду с абсолютной потребностью в ионах магния для проявления действия Gsu I и Есо57 I, что является характерным для рестриктаз всех известных типов, эти ферменты активируются Э-аденозил-Ь-метионином (Адо-мет) и никак не реагируют на присутствие в реакционной смеси АТФ. Повышение активности Gsu I за счет добавления Адо-мет было ощутимым и давало двухкратный ее прирост. В отношении Есо57 I этот эффект проявлялся в примерно 100-кратном увеличении активности фермента. Для Gsu I характерен полный гидролиз ДНК по всем узнаваемым участкам вне зависимости от присутствия Адо-мет. В случае Есо57 I исчерпывающего специфического фрагментирования не наблюдалось. Это, возможно, объясняется тем фактом, что даже в электрофоре-тически гомогенном препарате фермента содержится Есо57 I метилазная активность, чего не наблюдается даже в невысоко очищенных препаратах RGsu I.
