Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Вахтин Ю.Б. -> "Методы культивирования клеток" -> 82

Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.

Вахтин Ю.Б., Соминина А.А. Методы культивирования клеток — Л.: Наука, 1988. — 313 c.
Скачать (прямая ссылка): metodikultivirovaniya1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 171 >> Следующая

Мышиные ТК~-клетки широко применялись в качестве одного из родителей при гибридизации соматических клеток и наряду с ГГФРТ“-клетками использовались для картирования генов на хромосомах человека. На ТК~-клетках была отработана методика введения в клетки чужеродной ДНК, для этого использовался ген тимидинкиназы вирусного происхождения [18].
Устойчивость клеток к 6-азауридину и 5-фторуридину обусловливается отсутствием в устойчивых клетках уридинкиназы — фермента, фосфорилирующего уридин или его аналоги [19, 20]. Устойчивость к 5-фторурацилу связана с изменением активности оротидилдекар-боксилазы и оротатфосфорибозилтрансферазы [21].
Устойчивость к ингибиторам синтеза нуклеотидов de novo. Метотрексат, аналог дигидрофолиевой кислоты, прочно связывается с ферментом ДГФР, который превращает дигидрофолат, образующийся в тимидилатсинтетазной реакции, в тетрагидрофолат. В результате прочного связывания метотрексата с ферментом количество работающего в клетке фермента уменьшается. При селекции на устойчивость к метотрексату могут быть получены три типа устойчивых клеток. Клетки 1-го типа характеризуются изменением ди-гидрофолатредуктазы, клетки 2-го типа — измененной проницаемостью к агенту, клетки 3-го типа — повышенной активностью измененного фермента, что обусловлено амплификацией дигидро-фолатредуктазного гена [22—24]. Пять из шести ферментов синтеза УМФ de novo находятся в двух мультиферментных комплексах.
Первые три фермента представляют комплекс КАД (карбомилфос-фатсинтетаза, аспартаттранскарбамилаза и дигидрооротаза) и кодируются, по-видимому, одним геном. В результате селекции на устойчивость к Ы-фосфонацетил-Ь-аспартату, специфическому ингибитору аспартаттранскарбамилазы, образуются варианты клеток, продуцирующие избыточное количество аспартаттранскарбамилазы. Два других фермента, входящих в комплекс КАД, также синтезируются в избыточном количестве. Перепроизводство ферментов комплекса КАД в устойчивых клетках объясняется амплификацией гена данного локуса. Число копий гена может быть увеличено более чем в 100 раз [25].
Устойчивость к ингибиторам транскрипции. Взаимодействуя с РНК-полимеразой II, а-аманитин подавляет элонгацию мРНК. Устойчивость клеток к этому агенту возникает благодаря изменению субъединицы РНК-полимеразы II. Устойчивые клетки были получены из различных клеточных линий [26, 27].
Устойчивость к ингибиторам белкового синтеза. Устойчивость к эметину и дифтерийному токсину — веществам, специфически подавляющим белковый синтез, возникает благодаря изменению в рибосомальной 40S субъединице и в факторе элонгации-2 соответственно [28, 29]. Пактамицин, как и эметин, взаимодействует с 40S субъединицей рибосом. Устойчивость к этому агенту обусловливается, однако, сниженным поступлением агента в клетку [30].
Устойчивость к агентам, затрагивающим митохондриальные функции. Устойчивость к хлорамфениколу и олигомицину, подавляющим соответственно белковый синтез на митохондриальных рибосомах и работу митохондриальной АТФазы, наследуется как цитоплазматический признак и обусловливается изменениями тех локусов митохондриальной ДНК, которые кодируют соответствующие гены [31, 32].
Устойчивость к агентам, затрагивающим мембранные функции.
Уабаин проявляет свое токсическое действие, подавляя работу Na+/К+-АТФазы. Варианты, устойчивые к действию этого агента, могут быть отобраны из культур клеток мыши, хомячка и человека [33—35]. Во всех выше указанных случаях обнаружено изменение субъединицы №+/К+-АТФазы. Недавно были описаны клетки СНО, устойчивые куабаину, в которых Na +/К+-АТФаза не изменена [36]. Клетки, устойчивые к лектинам, являются мембранными мутантами, так как все они имеют изменения активности специфических гли-козилтрансфераз и как следстйие аномально гликозилированные гликопротеины и гликолипиды плазматической мембраны. Мутанты отличаются от клеток дикого трпа по связыванию с гормонами, токсинами, ростовыми факторами, а также по межклеточным взаимодействиям (подробнее см. обзор: 1 [3]).
Варианты с неспецифически Измененной проницаемостью плазматической мембраны могут быть тэкже получены при отборе на устойчивость к колхицину, винбластнйу, винкристину, актиномицину D, адриамицину, бромистому этидию (БЭ), к агентам, не действующим специфически на плазматическую мембрану и имеющим другие
Клеточные линии Селективный агеит Механизм токсического действия
селективного агента
L, V79, СНО.диплоидные 8-азагуанин, 6-тиогуа- Ингибирование de novo пурино
фибробласты человека нин вого биосинтеза фосфорили-
рованными продуктами селек
тивного агента
L, L5178y, СНО,диплоид 2,6-диаминопурин, То же
ные фибробласты 2-фтораденин, 8-аза-
человека аденин
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed