Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
25. Тертое В. В., Орехов А. Н., Рудченко С. А. и др. Определение содержания липидов в отдельной клетке с помощью проточной цитофлюорометрии // Докл. АН СССР. 1984. Т. 274. С. 1238—1241.
26. Darzinkiewicz Z., Traganos F., Scharpless Т., Melamed M. R. Recognition of cells in mitosis by flow cytofluorometry // J. Histochem. Cytochem. 1977. Vol. 25. P. 875—880.
27. Darzinkiewicz Z. Recent advance in the use of flow cytometry to study the cell cycle // Cell Tissue Kinet. 1983. Vol. 16. P. 521—527.
28. Crissman H. A., Egmond 1. V., Holdrinet R. S. et al. Simplified method for DNA and protein staining of human hematopoietic cell samples // Cytometry. 1981. Vol. 2. P. 59—62.
29. Latt S. A. Fluorometric detection of deoxyribonucleic acid synthesis; possibilities for interfacing bromodeoxyuridine dye techniques with flow fluorometry // J. Histochem. Cytochem. 1977. Vol. 25. P. 913—926.
30. Fried J., Perez A. G., Clarkson B. D. Flow cytofluorometric analysis of cell cycle distributions using propidium iodide // J. Cell Biol. 1976. Vol. 71. P. 172—181.
31. Baisch H., Beck P., Christensen 1. J. et al. A comparison of mathematical methods for the analysis of DNA histograms obtained by flow cytometry // Cell Tissue Kinet. 1982. Vol. 15. P. 235—241.
32. Кириллова Т. В., Розанов Ю. М., Мартынова И. М. Влияние УФ-облучения на митотический цикл клеток китайского хомячка с различной УФ-чувствительностью.
2. Временные зависимости при блокированном делении клеток // Цитология.
1985. Т. 12. С. 1380—1387.
33. Dosik G. М., Barlogie В., White R. A. et al. A rapid automated tatmokinetic method for determination of in vitro cell cycle transit times // Cell Tissue Kinet.
1981. Vol. 14. P. 121 — 134.
34. Bohmer R. M. Flow cytometric cell cycle analysis using the quenching of 33258 Hoechst fluorescens by bromodeoxyuridine incorporation // Cell Tissue Kinet.
1979. Vok, 12. P. 101 — 110.
35. Taylor W., Mitthorpe В. К¦ An evaluation of DNA fluorochromes, staining techniques and analysis for flow cvtometry // J. Histochem. Cytochem. 1980. Vol. 28. P. 1224—1232.
36. Krishan A. Rapid flow cytofluorometric analysis of mammalian cell cycle by propidium iodide staining // J. Cell Biol. 1975. Vol. 66. P. 188—193.
37. Tate E. H., Wilder М. E., Gram L. S., Wharton W. A method for staining 3T3 cell nuclei with propidium iodide in hypotonic solution // Cvtometry. 1983. Vol. 4. P. 211—215.
38. Crissman H. A., Stewenson A. P., Orlicky D. J., Kissane R. 1. Detailed studies of the application of three fluorescent antibiotics for DNA staining in flow cytometry // Stain Technol. 1978. Vol. 53. P. 321—330.
39. Jensen R. H. Chromomycine A3 as a fluorescent probe for flow cytometry of human gynecologic samples // J. Histochem. Cytochem. 1977. Vol. 25. P. 573—579.
40. Latt S. A., Georg Y. S., Gray J. W. Flow cytometric analysis of bromodeoxyuridine substituted cells stained with 33258 Hoechst // J. Histochem. Cytochem. 1977. Vol. 25. P. 927 —934.
41. Otto F. J., Oldiges Gohde W., Jain V. K. Flow cytometric measurement of nuclear DNA content variation as a potential in vivo mutagenicity test // Cytometry.
1981. Vol. 2. P. 189—191.
42. Gill J. E., Jotz М. M. Deoxyribonucleic acid cytochemistry for automated cytology // J. Histochem. Cytochem. 1974. Vol. 22. P. 470—476.
43. Barlogie B., Spitzer G., Hart J. S. et al. DNA histogram analysis of human hemopoietic cells // Blood. 1976. Vol. 48. P. 245—258.
Часть 3
Клеточная и генная инженерия
Получение генетически маркированных клеточных штаммов
К. В. Сальников
Институт цитологии АН СССР, Ленинград
.Генетические маркеры широко используются в современной молекулярной и клеточной биологии, генетике соматических клеток для получения микро- и полноклеточных гибридов и изучения типа наследования признака, картирования хромосом, получения гибридом, продуцирующих моноклональные антитела, для изучения различных аспектов ДНК-трансформации. Во всех перечисленных примерах используются свойства генетической комплементации. Варианты с измененной активностью ферментов или количественно измененным соотношением тех или иных белков сами по себе являются ценной моделью для изучения механизмов регуляции метаболических процессов. Важная задача биотехнологии — отбор клеток-продуцентов.
В настоящее время из постоянных и первичных клеточных линий с использованием различных селективных систем выделены ауксо-трофы и термочувствительные варианты, а также варианты, обладающие устойчивостью к ядам и антибиотикам. У прокариот такие варианты возникают, как правило, вследствие точковых мутаций (замены или делеции пар оснований), у соматических клеток in vivo и in vitro это не всегда так. Наблюдаемые изменения возникают вследствие целого ряда причин: это могут быть как замены или делеции пар оснований в структурном гене? так и дупликации и амплификации этих генов, стабильные изменения экспрессии генов, возникающие, например, вследствие хромосомных перестроек или встраивания выше или ниже гена вирусов, вирусоподобных элементов или мобильных генетических элементов. Изменения экспрессии генов могут зависеть от стабильно наследуемых изменений метилирования пар оснований. Изменения в структуру белка могут быть внесены, наконец, на уровне стабильного изменения сплайсинга РНК или посттрансляционной модификации самого белка. О том, что лежит в основе явлений, контролирующих созревание иРНК или белка, пока можно только догадываться. Известно огромное число вариантов соматических клеток со специфическими изменениями, генетическая природа которых не выяснена, однако многие из них используются как генетические маркеры главным образом из-за стабильного наследования этих изменений. Наиболее значительным по числу входящих в него вариантов классом генетических маркеров является класс
