Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Вахтин Ю.Б. -> "Методы культивирования клеток" -> 31

Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.

Вахтин Ю.Б., Соминина А.А. Методы культивирования клеток — Л.: Наука, 1988. — 313 c.
Скачать (прямая ссылка): metodikultivirovaniya1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 171 >> Следующая

Среда 199 [22] разработана в 1950 г. для культивирования фрагментов сердца из эмбриона цыпленка. Выбор и концентрация 61 компонента, кроме фенолового красного, соответствовали известным в то время данным о составе физиологических систем; критерием было сохранение жизнеспособности и специфической функции клеток, но не их размножение. Вследствие этого для среды 199 характерны широкий спектр питательных веществ и относительно невысокая их концентрация. Некоторые свойства среды 199, например наличие DL-аминокислот и отсутствие витамина Bi2, отражают ее солидный возраст. В настоящее время среда 199 используется без каких-либо добавок как поддерживающая для первичных клеток, а с сывороткой или с заменяющими ее белками — как ростовая среда для быстро размножающихся клеток.
Изначально основой среды 199 являлся раствор Эрла. В настоящее время применяются два варианта среды 199: на растворе Эрла или Хэнкса. В СССР производится только второй вариант. Таким
образом, при выборе между отечественными средами Игла и 199 следует иметь в виду, что помимо прочих различий первая из них в своей основе имеет раствор Эрла, а вторая — Хэнкса и, следовательно, они требуют различного содержания СОг в атмосфере.
Начиная с конца 50-х годов в качестве тест-системы для разработки новых сред использовались постоянные клеточные линии, главным образом мышиные фибробласты линии L. В течение ряда лет исследовательскими коллективами были созданы серии сред: NCTC — в Национальном институте по изучению рака (США), CMRL — в Медицинской исследовательской лаборатории в Коннауте (Канада), среды Уэймаут — в Джексоновской лаборатории (США). Наиболее широкое распространение получили среды NCTC-135, CMRL-1066 и МВ-752/1. Путем постепенной адаптации клеток, культивировавшихся ранее в сложных средах неопределенного состава, удалось добиться их размножения в этих средах с полностью определенным химическим составом, хотя добавление сыворотки увеличивает скорость размножения.
Бессывороточные среды
Процесс адаптации к стандартным средам определенного химического состава приводит к успеху обычно лишь в случае трансформированных клеток постоянных линий и включает в себя отбор. Отобранные клетки могут во многом отличаться от исходной культуры. Нормальные клетки, сохраняющие свои специфические функции, в таких средах не размножаются. В последние годы достигнут утптех в разработке бессывороточных сред. С одной стороны, в лаборатории Хэма созданы среды, состав которых оптимизирован для поддержания (при наличии относительно небольшого количества сыворотки) клонального роста клеток нескольких типов [21, 23, 24]: диплоидных фибробластов человека (MCDB-104 и MCDB-105), фибробластов из эмбриона цыпленка (MCDB-202) и утки (MCDB-501), клеток ЗТЗ и фибробластов из эмбрионов мыши (MCDB-401), кератиноцитов человека (MCDB-151 и MCDB-153).
Хотя, как видно из табл. 2, различия между MCDB-105 и MCDB-153 в основном количественные, эти среды являются селективными: фибробласты плохо размножаются в среде, оптимизированной для кератиноцитов, и наоборот.
С другой стороны, Сато и его последователи [25] добились бессывороточного роста различных клеток, используя стандартные среды и заменяя сыворотку специфичным для данного клеточного типа набором гормонов, гормоноподобных ростовых факторов, транспортных белков и факторов, способствующих прикреплению и распластыванию клеток (табл. 3). При этом многие клетки сохраняли способность к синтезу характерных для дифференцированного состояния веществ. В качестве базовой используют разные среды, но чаше всего смесь F-12 и DME (1:1). Это объясняется тем, что ассортимент питательных веществ F-12 достаточен для удовлетворения клеточных потребностей, а количественную нехватку незаме-
Группа веществ Наименование Эффективная концентрация
I
Г opWoHH Инсулин 0.1 ---10 мкг/мл
Глюкагон 0.05---5 »
Фолликулотропии 0.05---0.5 »
Ростовой гормон 0.05---0.5 »
Соматомедин С 1 ---100 иг/мл
Паратирин 1 --- 10 »
Тиреолиберин 1 --- 10 »
Люлиберин 1 --- 10 »
Трийодтиронин ?
т
О
o'
о
т
Г идрокортизон (10---100)- ю~9 м
Прогестерон 1 --- 100 »
Тестостерон 1 --- 10 »
Эстрадиол 1 --- 10 »
Ростовые ЭРФ 1 ---100 нг/мл
Предыдущая << 1 .. 25 26 27 28 29 30 < 31 > 32 33 34 35 36 37 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed