Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
ется необходимым компонентом для клеток многих линий, когда достаточное его количество образуется из других компонентов мини-
Наименование сред
NCTC*
135
мв- Мак-Коя- RPMI- F-I0 F-I2 MCDB- MCDB- MCDB-
752/1 5а 1640 105 153 202
и их производные
--- _ _ --- _ --- --- --- ---
9.ОЕ-6 1.8Е-3 3.6Е-5 2.1Е-5 5.0Е-6 I.0E-4 I.0E-4 I.0E-4 1.0Е-4
6.9Е-7 5.6Е-6 2.0Е-4 1.9Е-4 З.ОЕ-6 1.0Е-4 1.0Е-4 I.0E-4 1.0Е-4
--- --- --- - --- З.ОЕ-7 1.0Е-8 - 2.0Е-7
неорганические ионы
1.8Е-3 8.2Е-4 1.8Е-3 4.2Е-4 З.ОЕ-4 3.0Е-4 1.0Е-3 З.ОЕ-5 2.0Е-3
8.3Е-4 2.0Е-3 8.1Е-4 4.1Е-4 6.2Е-4 6.0Е-4 1.0Е-3 6.0Е-4 1.5Е-3
5.4р-3 2.6Е-3 5.4Е-3 5.4Е-3 4.4Е-3 З.ОЕ-З З.ОЕ-З 1.5Е-3 З.ОЕ-З
1.55-1 1.3Е-1 1.4Е-1 1.4Е-1 1.4Е-1 1.5Е-1 1.3Е-1 1.5Е-1 1.4Е-1
1.3Е-1 1.1Е-1 1.2Е-1 1.1Е-1 1.3Е-1 1.4Е-1 1.2Е-1 1.3Е-1 1 ЗЕ-1
--- --- --- 8.4Е-4 --- --- --- --- ---
1.0Е-3 2.7Е-3 1.0Е-3 5.6Е-3 1.7Е-3 1.0Е-3 З.ОЕ-З 2.0Е-3 5.0Е-4
8.3Е-4 8.1Е-4 8.1Е-4 4.2Е-4 6.2Е-4 6.0Е-6 1.0Е-3 4.5Е-6 1.5Е-3
элементы
7.4Е-6 1.5Е-7 5.5Е-10 3.7Е-9 1 -ОЕ-6 1 .ОЕ-6 1.0Е-7 З.ОЕ-7 1.0Е-7
--- --- --- --- 1.0Е-8 1.0Е-8 1.0Е-9 1.1Е-8 1.0Е-9
--- --- --- --- З.ОЕ-6 З.ОЕ-6 5.ОЕ-6 5.ОЕ-6 5.ОЕ-6
--- --- --- --- --- --- 1.0Е-9 1.0Е-9 5.0Е-10
--- --- --- --- --- --- 7.0Е-10 7.0Е-9 7.0Е-9
--- --- --- --- --- --- 5.0Е-10 5.0Е-10 5.0Е-12
--- --- --- --- --- --- З.ОЕ-8 З.ОЕ-8 З.ОЕ-8
--- --- --- --- --- --- 5.0Е-7 5.0Е-7 5.0Е-7
--- --- --- --- --- --- 5.0Е-10 5.0Е-10 5.0Е-12
--- --- --- --- --- --- 5.0Е-9 5.0Е-9 5.0Е-9
- - - - 1.0Е-7 З.ОЕ-6 5.0Е-7 5.0Е-7 1.0Е-7
индикатор
2.6Е-2 2.7Е-2 2.6Е-2 2.4Е-2 1.4Е-2 1.4Е-2 --- 1.4Е-2 ---
10 8 g* *** 5 5 2 5 2
_ _ _ _ _ _ З.ОЕ-2 2.8Е-2 3.0Е-2
5.5Е-5 2.8Е-5 7.1Е-6 1.4Е-5 З.ЗЕ-6 З.ЗЕ-6 З.ЗЕ-6 З.ЗЕ-6 З.ЗЕ-6
ч и е
8.7Е-4 --- --- --- --- --- --- ---
12.5 - - --- - - --- ---
необходимую концентрацию углекислого газа, эти среды обычно используются с 5 % СОа в воздухе или с двуокисью углерода, образуемой плотными культурами клеток в процессе метаболизма при культивировании в закрытых сосудах; ***** — эта среда предназначена для культивирования клеток в сосудах, допускающих газообмен с воздухом.
мальной среды. Потребность в бикарбонате (или СОг) возникает, в частности, при низкой концентрации клеток.
Среда MEM никогда не предназначалась для использования без сыворотки, поскольку не содержит всех необходимых веществ. Так, например, в ней отсутствуют такие трудно отделяемые от сыворотки незаменимые компоненты, как биотин, витамин В12, ионы железа и другие микроэлементы. Основой сред Игла является раствор Эрла, однако многие предприятия выпускают среды ВМЕ и МЕМ также на основе раствора Хэнкса. В СССР под названием «среда Игла» производится ВМЕ с солями по Эрлу. Среды Игла с солями по Хэнксу часто применяются на начальных этапах выращивания первичных культур.
Адгезивность клеток зависит от кальция, поэтому МЕМ без кальция используют для суспензионного культивирования. Концентрацию фосфата увеличивают при этом в 10 раз. Производятся и другие модификации сред Игла. Так, введение янтарнокислого натрия (100 мг/л) и янтарной кислоты (75 мг/л) позволяет стерилизовать среды автоклавированием. Глютамин и бикарбонат при этом стерилизуют отдельно. Заменимые (7 из 20) аминокислоты участвуют в синтезе белка и могут быть синтезированы большинством клеток. Однако это требует повышенного содержания незаменимых аминокислот и глюкозы. Кроме того, промежуточные продукты метаболизма, особенно серин и пируват, теряются клетками, растущими в условиях редкого посева. В случае медленного размножения клеток в МЕМ вводят, по рекомендации Игла, все заменимые аминокислоты (по 1 • 10-4 М) и пируват (1 • 10_3 М). Получаемый набор компонентов лежит в основе многих сред.
Среда Дульбекко обозначается DME или DMEM (Dulbecco’s modified'Eagle’s medium) и является наиболее распространенной модификацией среды Игла. Предложенная сначала для выращивания вируса полиомы в первичных культурах из мышиных эмбрионов, она используется при культивировании клеток самых различных типов, в том числе нетрансформированных клеток и гибридом, в присутствии сыворотки. В смеси с другими стандартными средами, чаще всего с F-12, DME является основой ряда бессывороточных сред; от среды Игла отличается наличием глицина, серина, пирувата, а также железа. Кроме того, в DM.E резко увеличены концентрации всех аминокислот и витаминов, бикарбоната, а в одном из вариантов— глюкозы. Выпускаются три варианта DME: 1) стандартный, содержащий пируват и глюкозу (см. табл. 2); 2) с повышенным содержанием глюкозы, но без пирувата; 3) с повышенным содержанием глюкозы и с пируватом. Для культивирования клеток в DM.E необходим СОг-инкубатор с 10% СОг в воздухе.
