Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
' Нами в течение года при культивировании ФГА-стимулированных ! лимфоцитов периферической крови 53 обезьян получено 24 (45.3 %)
ч лимфоидных суспензионных линий, имеющих В-клеточную характе-ристику (табл. 4). Методически культивирование проводили следую-¦ щим образом: из гепаринизированной крови выделяются мононукле-и арные клетки, разводятся питательной средой в концентрации (1.5— 2)- 106 клеток/мл и культивируются в объеме 5 мл в трех парал-> лельных пробирках. В одну из пробирок добавляют ФГА 2—5 мкг/мл т на 24—72 ч, после чего клетки отмывают от ФГА и разводят в ростовой среде. Через 24, 48, 72 ч последовательно часть культуральной жидкости (1—2 мл) из ФГА-стимулированной культуры пере-
носится в одну из пробирок с нестимулированными лимфоцитами, другая такая же пробирка представляет контроль. Через 6—7 сут культивирования подсчитывают клетки и меняют среду таким образом, чтобы первоначальная концентрация клеток сохранялась, т. е. объем среды постепенно уменьшается. Полная смена среды осуществляется 1 раз в неделю. Обычно через 3 нед культивирования объем среды уменьшается в 5 раз. К концу 4-й недели культивирования среда в пробирках, в которые трижды добавляли культуральную жидкость от ФГА-стимулированных лимфоцитов, а в части случаев и культуральная жидкость самих ФГА-стимулированных лимфоцитов, постепенно метаболизировалась, а количество живых клеток в них постепенно нарастало. В контрольных пробирках, куда не вносили культуральную жидкость митоген-стимулированных лимфоцитов, становления линий не происходило. Следует упомянуть, однако, что при культивировании мононуклеарных клеток обезьян со злокачественной лимфомой или людей, имеющих антитела к ВЗБ, лимфобластоидная трансформация может произойти приблизительно в эти же сроки.
Таким образом, при получении лимфоидных постоянных линий клеток из гемопоэтических органов больных опухолевыми заболеваниям^ кроветворной ткани людей и обезьян можно выделить три основных направления.
Первым из них является «спонтанное» становление лимфоидной линии, очевидно, связанное с культивированием in vitro непосредственна опухолевых клеток или клеток, содержащих геном лимфопролиферативных вирусов.
В основе второго направления лежит известное свойство лимфо-тропных вирусов вызывать трансформацию лимфоцитов в перевиваемые лимфобластоидные линии.
Получение лимфоидных линий методом сокультивирования также является результатом трансформации. Вообще использование трансформации является очень результативным методом и обеспечивает в чувствительной системе высокий процент получения трансформированных клеточных линий.
Третье направление — культивирование стимулированных лимфоцитов в присутствии факторов роста и получение факторзависи-мых или фактор-независимых линий.
Основным клеточным элементом всех лимфоидных линий является лимфоИдная клетка, имеющая морфологические параметры лимфобласта.
Процесс становления лимфоидных суспензионных линий клеток обезьян не отличается существенно от такового при культивировании опухолевых материалов людей, однако клеточный полиморфизм выражен в них больше. Как правило, клетки всех лимфоидных линий пролиферируют в суспензии без признаков прикрепления к твердому субстрату и образуют разной формы и величины конгломераты. Несмотря на морфологическое сходство клеток лимфоидных линий, имеется существенная разница в их иммунологических и функцио-
нальных характеристиках. Изучение биологических, культуральных, электрокинетических свойств клеточных лимфоидных линий обезьян позволило нам разработать критерии, лежащие в основе их классификации [13, 25], аналогичные имеющимся для культур человеческих клеток [26].
Таким образом, используя описанные методы, нами получено значительное количество лимфоидных постоянных суспензионных клеточных линий людей и обезьян, составляющих коллекцию НИИЭПиТ АМН СССР.
Литература
1. (Агрба В. 3., Дьяченко А. Г., Лапин Б. А. и др.) Agrba V. 1., Diatchenko A. G., Lapin В. A. et at. fso/ation of Epstein-Barr virus from cultured cells of a patient with Hodgkin’s disease // Exp. Pathol. 1977. Vol. 13. P. 289—295.
2. Агрба В. 3., Яковлева Л. А., Лапин Б. А. и др. Выделение вируса Эпстайн-Барр в суспензионных линиях клеток, полученных от людей, больных различными формами гемобластоза // Вопр. онкологии. 1978. Т. 24, № 9. С. 33—40.
3. Яковлева Л. А., Агрба В. 3., Букаева И. А. и др. Характеристика аутологичных лимфобластоидных культур, полученных из клеток обезьян и людей, больных гемобластозом//Моделирование патологических состояний человека. М., 1977. Т. 1. С. 5—14.
4. (Агрба В. 3., Лапин Б. А., Лебедев В. Н и др.) Agrba V. Z., Lapin В. A., Lebedev V. N. et al. The establishment of the suspension Epstein-Barr virus produsing cell lines from patients with tumoral diseases // Exp. Pathol. 1979. Vol. 17. P. 228— 236.
5. The Epstein-Barr virus / Eds M. A. Epstein, B. G. Achong. Berlin etc., 1979. 459 p.
6. Агрба В. 3., Лапин Б. А., Яковлева Л. А и др. Вирус герпеса в культурах клеток кроветворных органов павианов гамадрилов, страдающих гемобластозом // Вопр. онкологии. 1976. Т. 22, № 2. С. 44—50.
