Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Суспензионные линии клеток, полученные методом сокультивиро-вания. Совместное культивирование мононуклеарной клеточной фракции (выделенной из крови, селезенки, костного мозга, лимфатических узлов) с летально (при 6000 Р) облученными клетками; культур, продуцирующих трансформирующие герпесвирусы и ретровирусы, обычно занимает длительное время, в процессе которого производят смену лишь половины среды культивирования регулярно один раз в 4—7 сут. Через 45—60 сут культивирования во флаконах, в которых клетки претерпели трансформацию, среда культивирования закисляется, увеличивается клеточная масса, образовываются конгломераты клеток разной формы и величины. Методически сокуль-тивирование осуществляют следующим образом. Выделенные при центрифугировании в градиенте фиколл-верографина мононуклеары отмывают в ростовой среде дважды и затем культивируют в концентрации 5 • 106 клеток/мл в объеме 4 мл 24 ч при 37 °С в атмосфере 5 % СОг и 95 % воздуха. Затем к этим клеткам в объеме 1 мл добавляют 1 • 10® летально облученных клеток вируспродуцирующей линии. Дальнейшее культивирование продолжают уже в обычной атмосфере без добавления СОа. Лимфоидные линии клеток, полученные таким способом, имели В-клеточную характеристику.
В литературе последнее время описаны лимфоидные клеточные линии, полученные методом сокультивирования, которые могут иметь
Характеристика материалов, полученных от больных опухолевыми заболеваниями людей [1,4]
Характер заболевания Количество мате Культивируемая Число
риалов, исполь ткань получен
зованных для ных лнний
культивирования
Миелолейкоз (острый 7 Лейкоциты 5
и хронический) крови
Лимфогранулематоз 3 Селезенка 2
7 Лимфатиче 1
ский узел
Лейкемоидная реак 1 Лейкоциты 1
ция миелоидного крови
типа у больного
раком легких
Лимфолейкоз (хрони 4 Лейкоциты 1
ческий) крови
различную иммунологическую характеристику. Так, при сокультиви-ровании гематопоэтических клеток павиана, больного лимфомой, с летально облученными клетками, продуцирующими HVA (герпес-вирус ateles), были получены лимфоидные постоянные клеточные линии павианов, продуцирующие герпесвирус павианов [20]. Существуют и другого иммунологического типа клеточные линии, полученные таким способом: JM6 [21], МТ-2 [22], Si-1-3 [23, 24] и др.
Линия‘*МТ-2 [21] была получена сокультивированием периферических лимфоцитов женщины, больной острым Т-клеточным лейкозом, с лимфоцитами пупочного канатика ребенка мужского пола. Полученная в результате сокультивирования линия имела кариотип мужчины и Т-клеточную характеристику. Сокультивированием были получены лимфоидные линии обезьян, обозначенные Si-1, Si-3 [23, 24] и др. В ряде случаев трансформированные линии теряют свои ростовые потенции, которые могут быть восстановлены дополнительным введением TCGF.
Получение лимфоидных линий клеток путем трансформации лимфоцитов крови здоровых прнматов лимфотропиыми вирусами герпеса. Метод основан на способности лимфотропных вирусов герпеса трансформировать лимфоциты приматов, что приводит к появлению перевиваемых лимфобластоидных линий. Таким способом легко могут быть получены клеточные линии, и чем меньше возраст донора и выше титр трансформирующего вируса, тем быстрее. Эти линии имели характеристики, типичные для суспензионных лимфоидных линий, т. е. пролиферировали в жидкой фазе без признаков прикрепления к твердому субстрату, образовывали конгломераты клеток обычно крупных размеров, интенсивно метаболизировали среду культивирования. Методы культивирования этих линий не отличались особенностью, а способ получения был простым. Для получения таких линий клеток мононуклеары, отмытые от фиколл-верографина, ре-
Название линии Диагноз Культивируемая ткаиь Период Литературный
становле источник
ния, сут
ЧСЛ-1 Лимфогранулематоз Человек 40 [1---4, 20]
Лимфатический узел
ЧСЛ-2 Острый миелолейкоз Периферическая 68 Тот же
ЧСЛ-3 Рак легкого (лейке- кровь 61 »
То же
ЧСЛ-4 * моидиая реакция » 44 »
миелоидного типа)
