Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Среди многочисленных вариантов сред для культивирования этих клеток часто встречается среда DME с 10 % лошадиной или эмбриональной сыворотки коров. В качестве добавки используют 2—3 % эмбрионального экстракта птиц.
Процедура запуска дифференцировки: 1) культуру, достигшую плотности 60—70 %, обработать смесью трипсина (0.25 %) с версе-ном (0.02 %), 1 : 1, в течение 2—3 мин, смесь слить; 2) стряхнуть клетки, добавить 2—3 мм среды, суспензировать клетки, подсчитать в камере Горяева их концентрацию; 3) на чашке Петри диаметром 50—60 мм посеять 5 мл суспензии с концентрацией 2 • 105 клеток/мл (чашки предварительно покрыть раствором коллагена или желатина); 4) через 48 ч сменить среду на среду DME с 2 % лошадиной или эмбриональной сыворотки коров; варьируя условия культивирования, можно работать либо с пролиферирующими клетками либо с дифференцирующимися.
Через 3—4 сут наблюдается массовое слияние миобластов, на 5—6-е сутки — спонтанное сокращение зрелых миотуб. Количественная оценка миогенеза осуществляется так же, как и в первичных культурах.
Миогенез в постоянных клеточных линиях успешно реализуется при использовании бессывороточных сред. Среду с 10 % сыворотки при достижении монослоя заменяют на среду ММ-1 [18]. Она состоит из базовой среды F-12, фетуина (10~5 М), инсулина (10_6 М), дексаметазона (10-7 М).
1. Фридлянская И. И. Использование клеточных культур для изучения миогенеза // Проблемы миогенеза. Л., 1981. С. 188—208.
2. Фридлянская И. И. Постоянные клеточные линии, дифференцирующиеся in vitro // • Биология клетки в культуре. Л., 1984. С. 50—94.
3. Yaffe D. Retention of differentiation potentialities during prolonged cultivation of myogenic cells // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1968. Vol. 61. P. 477—483.
4. Richter C., Yaffe D. The in vitro cultivating and differentiation capacities of myogenic cell lines // Develop. Biol. 1970. Vol. 23. P. 1—22.
5. Turner D. C. Differentiation in cultures derived from embryonic chicken muscle // Differentiation. 1978. Vol. 10. P. 81—93.
6. Shainberg A., Yagil G., Yaffe D. Alteration of enzymatic activities during muscle differentiation in vitro // Develop. Biol. 1971. Vol. 25. P. 1—29.
7. Konigsberg I. R. Diffusion-mediated control of myoblast fusion // Develop. Biol. 1971. Vol. 26. P. 133—152.
8. Linkhart T. A., Hauschka S. D. Clonal analysis of vertebrate myogenesis // Develop. Biol. 1979. Vol. 69. P. 529—548.
9. Dallenmeir P., Turner D. C., Eppenberger H. M. Proliferation and differentiation of chick skeletal muscle cell cultured in a chemically defined medium // Exp. Cell.Res. 1981. Vol. 135. P. 47—61.
10. Pinset Ch., Whalen R. Control of cell proliferation and differentiation in the cell line L6 by manipulation of culture conditions // Hormonally defined media, a tool in cell biology: First Europ. Conf. on serum-free cell culture. 1982. P. 396—399.
11. Hauschka S. D., Konigsberg I. R. The influence of collagen on the development of muscle colonies // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1966. Vol. 55. P. 119—126.
12. Yaffe D. Cellular aspects of muscle differentiation in vitro // Cur. Top. Develop. Biol. 1969. Vol. 4. P. 37—75.
13. Fambrough D., Rash J. E. Development of acetylcholine sensitivity during myogenesis//Develop. Biol. 1971. Vol. 26. P. 55—68.
14. Puri E. C., Turner D. C. Serum-free medium allows chicken, myogenic cell to be cultivated in suspension and separated from attached fibroblasts // Exp. Cell Res.
1978. Vol. 115. P. 159—173.
15. Price P. J. Preparation and use of rat-tail collagen // Tissue Cult. Assoc. Manual. 1975. Vol. 1, N 1. P. 43—44.
16. Hauschka S. D. Cultivating of muscle tissue // Growth, nutrition and metabolism of cells in culture. New York; London, 1972. Vol. 2. P. 131 —170.
17. Pawlowski R., Szigeti V. Primary culture of chick embryoskeletal muscle on dextran microcarries // Europ. J. Cell Biol. 1984. Vol. 35. P. 296—303.
18. Florini 1. R., 'Roberts S. B. Serum-free medium for the growth of muscle cells in culture // In Vitro. 1979. Vol. 15. P. 983—992.
Культивирование клеток сердца
А. Б. Борисов
Институт цитологии АН СССР, Ленииград
Культивируемые клетки сердца являются удобным объектом исследования клеточных и молекулярных аспектов функции миокарда (о возможностях и перспективах их использования см.: [1, 2]). За последние годы значительно расширилось применение клеточных культур сердца в фармакологии [3], физиологии клеточных мембран [4] и цитологии кардиомиогенеза [5]. В то время как культуры клеток скелетной мускулатуры давно стали традиционным объектом изучения функциональной регуляции мышечной ткани, а методы их полу-
чения из различных источников приводятся в практических руководствах, культивирование высокодифференцированных миоцитов сердца до недавнего времени оставалось малодоступным: ввиду большой прочности межклеточных контактов вплоть до начала 70-х годов не удавалось изолировать неповрежденные мышечные клетки. Краткий исторический очерк культивирования клеток сердца можно найти в работе Волленбергера [6].
