Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Вахтин Ю.Б. -> "Методы культивирования клеток" -> 150

Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.

Вахтин Ю.Б., Соминина А.А. Методы культивирования клеток — Л.: Наука, 1988. — 313 c.
Скачать (прямая ссылка): metodikultivirovaniya1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 171 >> Следующая

Структура миллипорового фильтра, который является поддерживающим субстратом для культур,тво многом определяет морфологию новообразованной кости. Так, в отличие от культур, растущих на фильтрах HAWP, при эксплантации костного мозга на фильтры AUFS, проницаемые для клеток, образующаяся кость и окружающая ее ткань встраивается в толщу фильтра.
Остеогенез в культурах разобщенных костномозговых клеток проходит в общем те же этапы, что и в культурах фрагментов костного мозга, однако все стадии несколько отодвинуты по времени.
В культурах костного мозга человека остеогенез начинается с конца 4-й недели после эксплантации и продолжается в течение
2 мес. В культурах фрагментов костного мозга человека помимо остеоцитов и остеобластов явственно выявляются также многоядерные остеокласты, прилегающие к поверхности новообразованной кости и резорбирующие ее основное вещество.
Na-p-глицерофосфат может быть введен в состав питательной среды в любой момент культивирования на различные по продолжи-
тельности периоды времени. Это создает интересные возможности для изучения кальцификации костной ткани и позволяет анализировать ряд механизмов остеогенеза, которые с трудом поддаются изучению in vivo. Так, введение и последующее исключение глицерофосфата позволяет судить о том, на какой стадии формирования костный матрикс подвергается минерализации. При его введении в среду 16-суточных культур костного моага мыши через 3 сут происходит формирование тонкой кальцифицированной костной пластины, которая вся минерализуется. Отложение кальция происходит также в толще фильтра под костными балками на глубину проникающих в фильтр цитоплазматических отростков остеобластов. При исключении глицерофосфата из состава среды новообразованные слои кости не минерализуются, но в утолщенной костной пластине через 3—7 сут после отмены глицерофосфата отложения кальция сохраняются. Введение глицерофосфата на 3 сут в состав среды 19-суточных культур позволяет наблюдать минерализацию основного вещества кости в но-вообразующихся, но не в ранее образованных слоях костной пластины. Кальцификации подвергается не вся образованная in vitro кость, а те ее участки, которые строятся в присутствии глицерофосфата. Однако самый свежий слой основного вещества, непосредственно над которым располагаются остеобласты, не минерализуется.
Такая система позволяет оценивать остеогенез in vitro по нескольким количественным показателям: 1) по срокам начала остеогенеза; 2) по срокам начала минерализации; 3) по количеству костной ткани, образованной в культуре или подвергшейся минерализации за определенный период (последняя оценка может быть выполнена по включению радиоактивного кальция). Система дает возможность сравнивать остеогенные потенции костного мозга в норме и при ряде экспериментальных воздействий, а у человека — при различных патологиях, таких, например, как системные дефекты остеогенеза, пониженная способность костной ткани к регенерации, нарушения остеогенеза, связанные с гормональными расстройствами. В условиях культуры может быть осуществлен подбор лекарственных препаратов для лечения системных поражений остеогенеза. Становится также возможным определение роли отдельных категорий костномозговых клеток в процессе костеобразования и в его регуляции: эта задача может быть выполнена при эксплантации суспензий фракционированных костномозговых клеток. На модели остеогенеза в культурах костного мозга доступны для изучения факторы, влияющие на образование кости, на депонирование в ней кальция или стронция и на высвобождение этих веществ из костного депо. К числу факторов, которые могут стать объектом анализа в органных культурах костного мозга, относятся ростстимулирующие вещества (включая PDGF), гормоны, а также физические факторы, например гравитационная нагрузка, которая, как известно, оказывает решающее воздействие на процесс остеогенеза.
1. Фриденштейн А. Я., Чайлахян Р. К., Герасимов Ю. В. Стволовые стромальные клетки костного мозга // Стволовые клетки и опухолевый рост. Киев, 1985.
С. 80—87.
2. Фриденштейн А. Я., Чайлахян P. К-, Герасимов Ю. В. Пролиферативные и диф-ференцировочные потенции скелетогенных костномозговых колониеобразующих
1 клеток (КОКф) // Цитология. 1986. Т. 28. № 3. С. 457—464.
3. Owen М. Lineage of osteogenic cells and their relationship to the stromal system //
• Bone Mineral Res. 1985. Vol. 3. P. 1—25.
4. (Фриденштейн А. Я-, Чайлахян P. К., Лалыкина К. С.) Fridenshtein A. Ja., Chailachan R. K., Lalikina К¦ S. The development of fibroblast colonies in monolayer cultures of guinea pig bone marrow and spleen cells //Cell Tissue Kinet. 1970. Vol. 3. P. 393—403.
5. (Фриденштейн А. Я.) Fridenshtein A. la. Stromal mechanocytes of bone marrow: cloning in vitro and retransplantation in vivo//Immunobiology of bone marrow transplantation. Berlin, 1980. P. 19—29.
6. Фриденштейн А. Я., Лирия E. А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. М., 1980. 214 с.
7. (Фриденштейн А. Я.) Fridenshtein A. Ja. Precursor cells of mechanocytes // Intern. Rev. Cytol. 1976. Vol. 47. P. 327—359.
Предыдущая << 1 .. 144 145 146 147 148 149 < 150 > 151 152 153 154 155 156 .. 171 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed